本文關鍵詞：MicroRNA-497抑制炎癥相關基因在結(jié)腸癌細胞的表達　出處：《山西醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:建立高表達miR-497的結(jié)腸癌細胞模型;分析miR-497高表達結(jié)腸癌細胞的基因表達譜,篩選差異表達基因,探索在結(jié)腸癌細胞中miR-497對炎癥相關基因的影響。方法:1、高表達miR-497的結(jié)腸癌細胞模型的建立構(gòu)建miR-497慢病毒表達載體并進行慢病毒包裝;miR-497慢病毒感染結(jié)腸癌細胞,用流式分選技術(shù)結(jié)合嘌呤霉素篩選感染陽性的細胞;采用細胞計數(shù)法繪制高表達miR-497的結(jié)腸癌細胞及對照細胞的生長曲線。2、全基因組表達芯片篩選差異表達基因并驗證應用全基因組表達芯片篩選miR-497過表達后差異表達基因;MAS3.0生物信息注釋系統(tǒng)對差異表達基因進行GO分析和KEGG pathway分析;利用生物信息學網(wǎng)站Targetscan對miR-497進行靶基因預測,并對預測靶基因與下調(diào)基因取交集得到的基因進行pathway分析,篩選與炎癥相關的基因;RT-qPCR方法驗證差異基因在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的結(jié)腸癌細胞及結(jié)腸癌組織中的表達。結(jié)果:1、成功構(gòu)建了穩(wěn)定高表達miR-497結(jié)腸癌細胞株,GFP陽性細胞達90%以上,miR-497表達量是對照組的77倍(P0.05);miR-497穩(wěn)定高表達的結(jié)腸癌細胞增殖減慢。2、篩選出Absolute Fold change 3倍以上的差異基因共1053個,其中表達上調(diào)基因471個,下調(diào)基因582個;經(jīng)GO分析,下調(diào)基因主要參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、免疫反應、信號轉(zhuǎn)導等生物學過程;KEGG pathway分析表明,下調(diào)基因主要參與MAPK、細胞因子與受體、Jak-STAT等炎癥相關信號通路;下調(diào)基因中預測出miR-497可能的靶基因有125個,富集于MAPK和細胞因子與受體、Jak-STAT等信號通路;RT-qPCR驗證結(jié)果表明,選取的15個炎癥相關基因中有10個基因在miR-497高表達的HCT116細胞中表達下降,與芯片結(jié)果一致;其中IL29、TNFSF15、IL11、JAK3和IL2Rβ等5個基因在mi R-497低表達的結(jié)腸癌組織中表達上調(diào)。結(jié)論:穩(wěn)定高表達miR-497的結(jié)腸癌細胞建立成功;miR-497抑制炎癥相關基因在結(jié)腸癌細胞的表達
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35

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本文編號：1327805