本文關(guān)鍵詞：厚樸酚抑制人胰腺癌細胞生長及轉(zhuǎn)移的實驗研究

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【摘要】：胰腺癌是一種惡性程度極高、治療困難的消化系統(tǒng)腫瘤。臨床上80%以上的胰腺癌患者在確診時即為中晚期且多伴有遠處轉(zhuǎn)移,從而失去最佳手術(shù)時機。據(jù)資料顯示胰腺癌5年生存率低于1%,預后極差。因此,化療成為治療中晚期胰腺癌的主要手段。然而目前常用的化療藥物反應率并不高,且毒副作用較大。故臨床上急需尋找新型有效低毒的抗胰腺癌藥。厚樸酚是從植物厚樸樹的皮、根、莖中提取出的烯丙基連苯二酚類天然化合物,與和厚樸酚互為同分異構(gòu)體。厚樸酚不但有中樞神經(jīng)抑制作用,抗菌,抗病原微生物,抗?jié)冏饔?而且還具有抗炎,抗氧化,抗腫瘤,抑制血小板聚集等藥理作用。此外,研究發(fā)現(xiàn)厚樸酚可誘導腫瘤細胞凋亡,還能夠誘發(fā)細胞自噬,負向調(diào)控血管生成,從而抑制多種惡性腫瘤細胞的增殖。目的為了探究厚樸酚治療胰腺癌的臨床意義,在本研究中我們探討厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株增殖、凋亡和周期的影響以及厚樸酚體外抗胰腺癌細胞轉(zhuǎn)移活性的功能,同時還研究了厚樸酚體外抗胰腺癌的機制。方法(1)CCK-8檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株(PANC-1,CFPAC-1,ASPC-1,MIAPa Ca-2)增殖的影響。(2)Hochest染色法檢測不同濃度厚樸酚(0,40,80,120μmol/L)對人四種胰腺癌細胞株凋亡的影響。(3)流式細胞術(shù)檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株凋亡發(fā)生率的影響。(4)流式細胞術(shù)檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株周期的影響。(5)細胞基質(zhì)粘附實驗檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株粘附力作用。(6)細胞劃痕實驗檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株遷移能力作用。(7)Transwell小室重建基底膜侵襲實驗檢測不同濃度厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株侵襲力作用。(8)Western bloting法檢測厚樸酚對組織蛋白酶D(CTSD)蛋白表達的影響。(9)不同濃度厚樸酚處理MIAPa Ca-2細胞24h后,用Caspase-3分光光度法檢測細胞內(nèi)Caspase-3活性。(10)CTSD抑制劑(pepstatin A)預處理MIAPa Ca-2細胞24h后應用厚樸酚(40μmol/L)再次作用胰腺癌MIAPa Ca-2細胞,用流式細胞術(shù)檢測厚樸酚及pepstatin A對胰腺癌MIAPa Ca-2細胞凋亡的影響。(11)pepstatin A(100μmol/L)預處理MIAPa Ca-2細胞24h后應用厚樸酚(40μmol/L)再次處理胰腺癌MIAPa Ca-2細胞,用Caspase-3分光光度法檢測細胞內(nèi)Caspase-3活性變化。結(jié)果(1)不同劑量厚樸酚作用于四種胰腺癌細胞24 h,48 h,72 h后,均能抑制細胞的增殖作用,且厚樸酚在體外能以劑量和時間依賴方式抑制四種胰腺癌細胞的生長。(2)Hochest33258染色和流式細胞術(shù)實驗發(fā)現(xiàn)厚樸酚能夠促進細胞的凋亡、阻滯細胞周期的S期。(3)細胞粘附實驗、細胞劃痕實驗和細胞侵襲實驗證實了厚樸酚具有抑制胰腺癌細胞的粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。(4)Western bolting法檢測厚樸酚作用胰腺癌細胞后,其胞漿中CTSD的表達明顯增多。再次利用CTSD抑制劑(pepstatin A)和厚樸酚作用胰腺癌細胞后,用Caspase-3分光光度法檢測細胞內(nèi)Caspase-3含量的改變,其胞漿中的Caspase-3蛋白表達量與對照組相比并未發(fā)生明顯變化,進一步證明了厚樸酚誘導細胞凋亡的機制是上調(diào)CTSD的表達,誘發(fā)Caspase-3的活化,最終誘導胰腺癌細胞凋亡。結(jié)論厚樸酚對人四種胰腺癌細胞株不僅具有明顯抑制增殖、促進凋亡的作用,而且減弱了胰腺癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。同時,厚樸酚誘導細胞凋亡的機制可能是啟動CTSD參與細胞凋亡途徑,上調(diào)CTSD的表達,誘發(fā)Caspase-3的活化,最終誘導胰腺癌細胞凋亡。
【學位授予單位】：成都醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

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9 朱sヨ，

本文編號：1252075