本文關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌組織中經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性mRNA表達(dá)與肝癌細(xì)胞免疫逃逸相關(guān)性的研究

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【摘要】：經(jīng)典HLAⅠ類基因包括HLA-A、-B、-C三個(gè)座位,在人群中具有高度多態(tài)性,每個(gè)基因座位來(lái)自父母的兩種等位基因產(chǎn)物共顯表達(dá)于有核細(xì)胞表面,作為NK細(xì)胞和CTL的重要配體在調(diào)節(jié)免疫效應(yīng)細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Cytotoxicity T lymphocyte,CTL)和自然殺傷(Natural Killer,NK)細(xì)胞是免疫監(jiān)視中最重要的兩類效應(yīng)細(xì)胞。HLA Ⅰ類分子在調(diào)節(jié)CTL和NK細(xì)胞的殺傷功能中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用。CTL殺傷靶細(xì)胞時(shí)必須首先識(shí)別HLAⅠ類分子遞呈的抗原肽,即T細(xì)胞的MHC限制性。因此經(jīng)典HLA Ⅰ類分子表達(dá)缺失或降低有利于腫瘤細(xì)胞對(duì)CTL的免疫逃逸。NK細(xì)胞表面表達(dá)的抑制性殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR),與經(jīng)典HLA Ⅰ類分子結(jié)合后抑制NK細(xì)胞的活化。因此HLAⅠ類分子表達(dá)上調(diào)或者不變有利于腫瘤細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞的免疫逃逸。在絕大多數(shù)腫瘤中,經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)缺失或降低,使得腫瘤細(xì)胞逃逸CTL殺傷；而在肝癌中發(fā)現(xiàn),絕大多數(shù)肝癌組織的經(jīng)典HLA Ⅰ類分子表達(dá)上調(diào)或不變。不同于外周血及其他臟器,肝臟中NK細(xì)胞的比例約30%,和T細(xì)胞數(shù)目相當(dāng),在NK細(xì)胞和CTL的雙重免疫監(jiān)視下,肝癌細(xì)胞必須具有獨(dú)特的免疫逃逸機(jī)制。由于經(jīng)典HLAⅠ類分子與KIR分子均具有高度多態(tài)性,不同等位基因編碼的經(jīng)典HLA I類分子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的殺傷活性中發(fā)揮了不同作用,因此,為了逃逸NK細(xì)胞和CTL的殺傷,肝癌中可能存在HLAⅠ類等位基因的選擇性異常表達(dá),即同一位點(diǎn)的兩條等位基因表達(dá)水平變化不同。目前肝癌中經(jīng)典HLA I類等位基因表達(dá)水平的檢測(cè)未見報(bào)道。我們以原發(fā)性肝細(xì)胞癌為研究對(duì)象,首先對(duì)肝癌組織標(biāo)本HLA基因和KIR基因進(jìn)行分型,根據(jù)HLA分型結(jié)果設(shè)計(jì)HLA-A,-B,-C等位基因特異性定量PCR引物并驗(yàn)證,然后通過(guò)real time PCR對(duì)72例原發(fā)性肝癌組織樣本進(jìn)行HLA Ⅰ類等位基因mRNA表達(dá)的檢測(cè),結(jié)合KIR分型結(jié)果探討肝癌細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。研究結(jié)果如下：1.本實(shí)驗(yàn)利用PCR-SBT方法完成HLA-A、-B、-C基因分型的樣本例數(shù)分別為40例、3l例、72例；PCR-SSP方法完成33例樣本的12個(gè)KIR基因分型。2.本實(shí)驗(yàn)完成HLA-A/C等位基因特異性定量PCR引物的設(shè)計(jì)與驗(yàn)證,共設(shè)計(jì)完成符合實(shí)驗(yàn)要求的20對(duì)HLA-C和4對(duì)HLA-A等位基因特異性定量PCR引物。3.本實(shí)驗(yàn)完成80個(gè)HLA-A、62個(gè)HLA-B及144個(gè)HLA-C等位基因mRNA在肝癌和癌旁組織中表達(dá)水平的檢測(cè)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果,共統(tǒng)計(jì)了144個(gè)HLA-A、140個(gè)HLA-B、144個(gè)HLA-C等位基因]mRNA定量表達(dá)的結(jié)果,其中肝癌相比于癌旁,HLA-A等位基因上調(diào)表達(dá)36.11%,表達(dá)一致47.92%,下調(diào)表達(dá)15.97%；HLA-B等位基因上調(diào)表達(dá)26.43%,表達(dá)一致43.57%,下調(diào)表達(dá)30%；HLA-C等位基因上調(diào)表達(dá)27.78%,表達(dá)一致41.67%,下調(diào)表達(dá)30.55%。4.作為抑制性KIR配體的HLA-Bw4表達(dá)上調(diào)比例(45.46%)高于非KIR配體的HLA-Bw6表達(dá)上調(diào)比例(20.95%),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.006)。抑制性KIR配體HLA-C*03在NK細(xì)胞活性高的KIR-BX個(gè)體中上調(diào)比例(62.5%)高于KIR-AA個(gè)體中的上調(diào)比例(14.29%),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.011)。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們?cè)O(shè)計(jì)并驗(yàn)證完成經(jīng)典HLA I類等位基因特異性的定量PCR引物,能夠定量分析同一HLA基因座位不同等位基因mRNA表達(dá)水平。在72例肝癌和癌旁組織中的研究結(jié)果表明,肝癌細(xì)胞中存在經(jīng)典HLA I類等位基因選擇性得異常表達(dá),且抑制NK細(xì)胞活性的HLA等位基因選擇性高表達(dá),可能是肝癌細(xì)胞在NK細(xì)胞與CTL雙重免疫壓力下的免疫逃逸機(jī)制之一。經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性定量PCR引物的設(shè)計(jì)為同一HLA基因座位不同等位基因mRNA表達(dá)的定量定性分析提供了方法,在HLA表達(dá)相關(guān)的病毒免疫、腫瘤免疫、自身免疫等領(lǐng)域研究中具有重要應(yīng)用價(jià)值；HLA基因具有高度多態(tài)性,本研究為深入探討肝癌細(xì)胞免疫逃逸機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),還需擴(kuò)大樣本量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1243138