發(fā)布時(shí)間：2017-11-17 04:21

  本文關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞線粒體生成及遷移侵襲能力的影響

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【摘要】：背景亞硝酸鹽是癌啟動(dòng)劑的觀念已經(jīng)根深蒂固,然而目前尚缺乏亞硝酸鹽致癌的直接實(shí)驗(yàn)性依據(jù)。近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)低劑量的亞硝酸鹽具有降血壓、降血脂、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和減輕器官缺血再灌注損傷的藥理作用。在將亞硝酸鹽開發(fā)為臨床藥物之前,必須了解亞硝酸鹽對(duì)合并癌癥患者的影響。癌的發(fā)生發(fā)展不僅需要癌的啟動(dòng),而且依賴癌的促進(jìn)。癌的促進(jìn)包括癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。癌細(xì)胞的這些行為都需要能量,線粒體是能量產(chǎn)生的主要場(chǎng)所。線粒體是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的細(xì)胞器,通過線粒體生成和線粒體自噬調(diào)控線粒體質(zhì)量。線粒體質(zhì)量的變化與癌的促進(jìn)關(guān)系密切。了解亞硝酸鹽對(duì)癌細(xì)胞線粒體生成的作用,對(duì)進(jìn)一步研究亞硝酸鹽的促癌作用有重要意義。目的研究亞硝酸鹽對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞線粒體生成的影響,為亞硝酸鹽促癌這一觀點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法用系列濃度的亞硝酸鈉在常氧下孵育人肝癌SMMC-7721細(xì)胞24 h,用MTT法測(cè)定吸光度值反映細(xì)胞活力;用ROS示蹤劑觀察細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化;Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力;用微絲示蹤劑染色應(yīng)力纖維和偽足、Mito-Tracker Red染色線粒體,在熒光顯微鏡下觀察其形態(tài)、數(shù)量及分布情況;RT-PCR檢測(cè)線粒體標(biāo)志分子COXⅠ和COXⅣ基因的表達(dá);在激光共聚焦顯微鏡下觀察被Mito-Tracker Green染色的線粒體的質(zhì)量變化;HIF-1ɑ、線粒體生成標(biāo)志分子PGC-1α和細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)水平用Western blot方法檢測(cè)。結(jié)果MTT法結(jié)果發(fā)現(xiàn)16 mg·L-1亞硝酸鈉作用24 h對(duì)細(xì)胞活力的促進(jìn)作用最強(qiáng);ROS示蹤劑DCFH-DA孵育細(xì)胞,在熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn),亞硝酸鈉明顯增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)ROS水平;Transwell小室實(shí)驗(yàn)顯示,亞硝酸鈉孵育細(xì)胞24 h,可以明顯增強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲能力;微絲示蹤劑和Mito-Tracker Red共染色,熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn),亞硝酸鈉促進(jìn)應(yīng)力纖維和偽足增加,線粒體呈現(xiàn)核周分布,以上現(xiàn)象均可以被活性氧清除劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抑制;RT-PCR結(jié)果顯示,亞硝酸鈉明顯降低線粒體標(biāo)志分子COXⅠ和COXⅣ基因的表達(dá);Mito-Tracker Green染色,激光共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn),亞硝酸鈉明顯減少線粒體質(zhì)量;Western blot結(jié)果顯示,HIF-1ɑ蛋白表達(dá)水平升高,線粒體生成標(biāo)志分子PGC-1α和細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)水平降低,這些現(xiàn)象同樣被NAC所逆轉(zhuǎn)。結(jié)論低劑量亞硝酸鈉通過ROS/HIF-1ɑ途徑減少人肝癌SMMC-7721細(xì)胞線粒體生成,促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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