本文關鍵詞：截短型PF4慢病毒載體的構建及抗血管新生活性研究

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【摘要】：血管新生對于實體瘤的生長與轉移是一個關鍵步驟,抑制腫瘤血管的生成可以達到抑制腫瘤生長的目的,因此以腫瘤血管新生為靶點的治療策略逐漸發(fā)展成為腫瘤治療領域的研究重點。血小板因子4(platelet factor-4,PF4)是一種內源性抗血管生成因子,它通過多種機制抑制內皮細胞的遷移和增殖,以此抑制血管生成。慢病毒載體作為一種常用且研究較多的基因轉移系統(tǒng),以其能轉染較難轉染的細胞、組織,將治療基因安全有效的整合到靶細胞基因組中,目的基因表達穩(wěn)定持久、轉移基因容量較大等優(yōu)勢,在基因治療中扮演重要角色。隨著研究的深入,慢病毒載體在腫瘤基因治療方面也取得了很大進展。本課題構建了攜帶截短型血小板因子4片段——PF447-70-RGD的慢病毒表達載體,將其包裝為活性病毒,并以其介導的PF447-70-RGD為研究對象,探討其體外抑制血管新生的生物學活性,為抗血管生成基因療法治療腫瘤奠定了基礎。本研究首先將血小板因子4片段PF447-70-RGD,從保存的載體pcDNA3.1(+)-PF447-70-RGD上擴增出來,然后將其插入慢病毒表達載體pLV-MCS-Bsd中,構建出慢病毒表達載體pLV-PF447-70-RGD。其次,將構建好的慢病毒表達載體連同慢病毒包裝系統(tǒng)的三個輔助質粒,共同轉染293T細胞,進行慢病毒的包裝生產,應用實時熒光定量PCR法(Realtime Quantitative PCR,Q-PCR)測定收獲病毒的滴達6.16×107IU/ml。再次,將獲得的空載慢病毒(pLV-MCS-Bsd)和重組慢病毒(pLV-PF447-70-RGD)分別感染人肺腺癌A549細胞系,在殺稻瘟菌素(Blasticidin,Bsd)壓力下篩選出對應的穩(wěn)定表達細胞系,然后在基因水平上通過RT-PCR,蛋白水平上通過Western Blot來檢測PF447-70-RGD重組肽的表達。最后,進行體外活性實驗,研究重組病毒轉導的PF447-70-RGD基因功能及感染的A549細胞培養(yǎng)上清中分泌的重組肽的功能,即收集病毒顆粒和穩(wěn)轉PF447-70-RGD的A549細胞的培養(yǎng)液,用MTT法檢測對人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)增殖的作用,并觀察穩(wěn)轉PF447-70-RGD的A549細胞培養(yǎng)液對HUVEC小管形成的影響。結果表明:實驗組相對于對照組,能明顯抑制HUVEC細胞增殖,抑制率為36.7%,而且能夠顯著抑制HUVEC細胞小管形成。
【學位授予單位】：天津大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5

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1 李振宇;慢病毒載體構建及結構優(yōu)化[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年05期

2 主鴻鵠;慢病毒載體及其對低分裂潛能細胞的基因轉移[J];白血病.淋巴瘤;2003年01期

3 楊宇娟,裴冬生,徐開林,潘秀英,何徐彭,張成靜;survivin反義RNA的克隆及慢病毒載體的構建[J];徐州醫(yī)學院學報;2005年06期

4 焦伊勝;王永來;張淑蘭;王桂玲;;凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒載體的構建與鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2008年24期

5 褚波;黃雪峰;唐云明;;慢病毒載體及其應用進展[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2008年01期

6 毛穎佳;鄭源強;石艷春;;慢病毒載體及其應用的研究進展[J];中國生物制品學雜志;2009年02期

7 曾錦芳;王少元;;慢病毒載體及其在血液病研究中的應用進展[J];醫(yī)學綜述;2011年08期

8 馬強;舒文;李明;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的改進[J];熱帶醫(yī)學雜志;2011年08期

9 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應用研究進展[J];包頭醫(yī)學院學報;2011年05期

10 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強;王娟;張敬之;;慢病毒載體轉錄通讀率檢測方法的建立[J];生物工程學報;2013年07期

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1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構建及神經(jīng)干細胞轉染[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構建及其包裝細胞系的建立[A];中華醫(yī)學會第八次全國血液學學術會議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關受體α基因超表達慢病毒載體的構建[A];中華醫(yī)學會第六次全國骨質疏松和骨礦鹽疾病學術會議暨中華醫(yī)學會骨質疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構建[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2010年學術交流會論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構建、改造及其包裝細胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質干細胞的病毒載體研究[A];第十三次全國臨床藥理學學術大會論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構建及其在肝細胞中的表達鑒定[A];中國科協(xié)第十四屆年會第十七分會場環(huán)境危害與健康防護研討會論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構建、改造及其包裝細胞系的建立[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學術論壇交流會暨臨床藥學與藥學服務研究進展培訓班論文集[C];2011年

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1 原莉莉;慢病毒載體介導的HSP47 siRNA抑制PVR的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

2 張志強;輻射誘導型SOD2過表達慢病毒載體的構建及其在結腸癌放療中的輻射防護和放療增敏效應[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

3 楊玉芳;用LMP1構建重組慢病毒載體及建立轉基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

4 徐世永;慢病毒載體法高效轉基因雞制備技術研究[D];南京農業(yè)大學;2007年

5 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構建及其功能的相關性研究[D];鄭州大學;2011年

6 吳福國;表達Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構建及其對膀胱癌細胞影響的實驗研究[D];蘭州大學;2007年

7 馬強;腫瘤翻譯調控蛋白（TCTP）對結腸癌細胞LoVo的生物學特性影響及安全型慢病毒載體構建探索[D];南方醫(yī)科大學;2009年

8 郝又國;攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護作用[D];華中科技大學;2009年

9 楊歡;慢病毒介導中國人產甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉染肝干細胞的實驗研究[D];華中科技大學;2011年

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1 熊冬蘭;白細胞介素-18基因慢病毒表達載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構建及在肝癌細胞中的表達與功能初步研究[D];川北醫(yī)學院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過表達載體的構建[D];河北聯(lián)合大學;2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對體外骨髓間充質干細胞向神經(jīng)細胞分化的影響[D];鄭州大學;2015年

5 王碩;慢病毒介導BMPR Ⅱ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

6 操儲云;4個沉默雞Ii基因慢病毒載體的構建及其效果比較[D];安徽農業(yè)大學;2014年

7 楊碧慧;RNA干擾靶向沉默SPAG6基因對人MDS細胞體內外生長的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 王旋;SIRT2調節(jié)HSP90活性的分子機制[D];河南大學;2015年

9 張U，

本文編號：1188219