本文關(guān)鍵詞：4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對人胃癌SGC-7901細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的研究

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【摘要】：全反式維甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)作為常用誘導(dǎo)分化劑已廣泛應(yīng)用,在臨床上主要用于急性早幼粒細(xì)胞白血病的治療,其機(jī)制是能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化成正常細(xì)胞或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,從而達(dá)到治愈目的。臨床發(fā)現(xiàn)維甲酸類藥物有嚴(yán)重的綜合征、耐藥以及復(fù)發(fā)率高等缺陷,使得其應(yīng)用受限。本實(shí)驗(yàn)室以ATRA為先導(dǎo)化合物,對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,再經(jīng)過體外藥效學(xué)篩選,發(fā)現(xiàn)4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)具有較強(qiáng)的抗腫瘤增殖和誘導(dǎo)分化活性,期望開發(fā)成為一種新型抗腫瘤藥。本研究以人胃癌細(xì)胞株SGC-7901為研究對象,通過磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的方法,研究ATPR作用于胃癌細(xì)胞后蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,并找到誘導(dǎo)分化的作用靶點(diǎn)來解釋作用機(jī)制。目的:本研究觀察新型維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)作用于胃癌SGC-7901細(xì)胞后蛋白質(zhì)的磷酸化情況來了解ATPR誘導(dǎo)分化作用的可能機(jī)制,并找到誘導(dǎo)分化的作用靶點(diǎn)來解釋作用機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)分成兩個組,ATPR組(選用終濃度為10-6 mol/L)和正常組,作用于胃癌SGC7901細(xì)胞48h后,通過胰蛋白酶酶解,Ti O2磁珠法富集磷酸肽,高分辨率液質(zhì)聯(lián)用儀器檢測磷酸肽,使用Xcalibur 2.1工作站及Proteome Discoverer1.2軟件找到與正常組相比表達(dá)差異的蛋白質(zhì)和磷酸化位點(diǎn),利用生物信息學(xué)網(wǎng)站和軟件DAVID、KEGG、IPA軟件,分析這些磷酸化蛋白質(zhì)的功能及亞細(xì)胞定位等信息,對發(fā)現(xiàn)的差異蛋白進(jìn)行闡述。結(jié)果:磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果顯示鑒定出109個蛋白質(zhì),其中包括45個磷酸化蛋白質(zhì)。質(zhì)譜分析共鑒定出121個磷酸化位點(diǎn),其中絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸位點(diǎn)分別為82、33、6個。這些磷酸化蛋白質(zhì)中有15個與正常組相比較僅出現(xiàn)在ATPR組,20個蛋白質(zhì)與ATPR組相比較僅出現(xiàn)在正常組。DAVID分析結(jié)果顯示差異磷酸化的蛋白質(zhì)參與調(diào)控細(xì)胞進(jìn)程、生物進(jìn)程、生物學(xué)、基因表達(dá)、大分子代謝過程、初級代謝過程、細(xì)胞的代謝過程等;而根據(jù)亞細(xì)胞定位分析不同的磷酸化蛋白質(zhì),差異磷酸化蛋白質(zhì)主要分布于在細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核;差異磷酸化蛋白質(zhì)的分子功能主要參與蛋白質(zhì)和核酸的連接。KEGG分析差異磷酸化蛋白質(zhì)可能參與的信號通路,主要有表皮生長因子受體(ERBB)信號通路、RNA的降解、RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工過程、剪接體形成、p53信號通路等。IPA軟件分析差異蛋白質(zhì)的關(guān)聯(lián)性,發(fā)現(xiàn)泛素連接酶(UBC)成為了鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)與腺苷酸環(huán)化酶關(guān)聯(lián)蛋白1(CAP1)、DNA同源家族C蛋白5(DNAJC5)與核帽連接蛋白1(NCBP1)、結(jié)節(jié)蛋白(TSC2)與m RNA脫帽增強(qiáng)蛋白4(EDC4)的關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì),提示泛素連接酶參與了調(diào)節(jié)RNA和凋亡的各個過程。差異磷酸化蛋白質(zhì)中肝癌衍生生長因子(HDGF)、CAST、ATP結(jié)合盒G亞族蛋白4(ABCG4)和CAP1可能在ATPR作用后發(fā)揮重要作用。結(jié)論:1.ATPR參與調(diào)節(jié)細(xì)胞進(jìn)程、基因表達(dá)、細(xì)胞代謝過程等,以及蛋白質(zhì)和核酸的連接過程;并參與ERBB信號通路、RNA的降解、RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工過程、剪接體形成、p53信號通路等,從而發(fā)揮誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞分化的作用。2.ATPR對胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞誘導(dǎo)分化的機(jī)制可能是通過作用于多種蛋白質(zhì)或基因,如HDGF、CAST、ABCG4和CAP1而發(fā)揮作用,并通過影響這些蛋白質(zhì)的磷酸化從而實(shí)現(xiàn)ATPR對胃癌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用。這些蛋白質(zhì)有待更深一步的研究驗(yàn)證,從而更好地解釋ATPR的作用機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：ATPR 人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 張志培;周勇安;徐抴;黃立軍;韓勇;田玉兔;鄧迎春;陸遠(yuǎn);李小飛;;非小細(xì)胞肺癌組織ABCG4表達(dá)與耐藥的相關(guān)性研究[J];中華腫瘤防治雜志;2009年01期

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本文編號：1069605