靶向沉默RACK1基因對肺腺癌A549細胞化療敏感性的影響
發(fā)布時間:2017-10-20 18:25
本文關鍵詞:靶向沉默RACK1基因對肺腺癌A549細胞化療敏感性的影響
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【摘要】:目的:研究靶向沉默RACK1基因對肺腺癌A549細胞化療藥物敏感性的影響,探討其可能的作用機制。方法:設計并合成靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列。實驗分組為RACK1-sh RNA(實驗組)、Vector-sh RNA(空載質粒組)和Control(空白對照組)三組。采用脂質體(Lipofectamine 2000)轉染的實驗方法,將靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列轉染至A549細胞,然后進行以下實驗:(1)在熒光倒置顯微鏡下觀察A549細胞的轉染情況。(2)Western blot法檢測轉染后A549細胞中RACK1蛋白的表達。(3)MTT法檢測轉染后A549細胞對順鉑、吉西他濱、培美曲塞和紫杉醇四種不同類型化療藥物敏感性的影響。(4)Western blot法檢測轉染后A549細胞中肺耐藥蛋白(LRP)和多藥耐藥蛋白(MRP)的表達。結果:1將轉染24h后的A549細胞在熒光倒置顯微鏡下觀察,在A549細胞中出現(xiàn)綠色熒光,說明轉染成功;2轉染36h后,Western blot法檢測RACK1-sh RNA組RACK1蛋白的相對表達量為:0.267±0.47,明顯低于Vector-sh RNA組(相對表達量為0.821±0.109)及Control組(相對表達量為0.842±0.060),與Vector-sh RNA組及Control組相比,差異有統(tǒng)計學意義(F=54.438,p0.05),Vector-sh RNA組與Control組相比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);3 MTT法檢測示RACK1-sh RNA組細胞生長明顯受到抑制,該組A549細胞對順鉑及紫杉醇的敏感性明顯增加。順鉑、紫杉醇在36h、72h檢測時對RACK1-sh RNA組A549細胞的抑制率顯著增高,與Vector-sh RNA和Control組相比,差異有統(tǒng)計學意義(F順鉑36h=6.628,F紫杉醇36h=7.291,均p0.05;F順鉑72h=7.560,F紫杉醇72h=25.132,均p0.05);4 Western blot結果顯示,RACK1-sh RNA組別A549細胞中相關耐藥蛋白LRP和MRP的相對表達量為分別:0.163±0.056、0.246±0.050,與Vector-sh RNA組(0.420±0.080、0.644±0.057)及對照組(0.444±0.041、0.617±0.031)相比表達量均下降,差異有統(tǒng)計學意義(FLRP=19.430、FMRP=61.548,均p0.05)。結論:靶向沉默RACK1基因可提高A549細胞對鉑類和紫杉醇類化療藥物的敏感性,其作用可能是通過下調LRP及MRP的表達而實現(xiàn)的。
【關鍵詞】:肺腺癌A549細胞 RACK1基因 RNA干擾 LRP MRP
【學位授予單位】:山西醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R734.2
【目錄】:
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 常用縮寫詞中英文對照表9-10
- 前言10-12
- 1 材料與方法12-22
- 1.1 實驗材料與儀器12-14
- 1.2 實驗方法14-22
- 2 結果22-28
- 2.1 A549 細胞的轉染情況觀察22
- 2.2 RACK-1 蛋白的表達檢測22-23
- 2.3 靶向沉默A549 細胞中RACK-1 基因后對化療藥物敏感性的影響23-27
- 2.4 靶向沉默A549 細胞中RACK1 基因后對LRP和MRP表達的影響27-28
- 3 討論28-32
- 4 結論32-33
- 參考文獻33-39
- 綜述39-53
- 參考文獻48-53
- 致謝53-54
- 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果54-55
- 個人簡歷55
【參考文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 朱薇;賀修勝;肖志強;易紅;姜浩;;RACK1在大腸癌癌變過程中的表達和意義[J];國際病理科學與臨床雜志;2013年01期
,本文編號:1068665
本文鏈接:http://www.sikaile.net/yixuelunwen/zlx/1068665.html
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