本文關(guān)鍵詞：骨橋蛋白（OPN）在TLR2信號通路介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞浸潤與轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 骨橋蛋白（OPN） Toll樣受體2 乳腺癌細(xì)胞 Pam3CSK4 LTA

【摘要】：乳腺癌是女性中發(fā)病率高，危害大的癌癥之一，嚴(yán)重影響女性的身心健康。治療乳腺癌的難點(diǎn)在于乳腺癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的浸潤與轉(zhuǎn)移能力，這也是造成乳腺癌患者死亡率高的主要原因。因此對乳腺癌細(xì)胞浸潤與轉(zhuǎn)移機(jī)制的深入研究，對乳腺癌的預(yù)防以及臨床治療具有重要意義。 骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）是一種磷酸化糖蛋白，它可以在胞內(nèi)發(fā)揮作用，也可以分泌到細(xì)胞外發(fā)揮其生理功能。OPN可以參與到許多生理病理過程中，如炎癥反應(yīng)，免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡等。也可通過與細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的粘附、浸潤與轉(zhuǎn)移。但是，目前對OPN在腫瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制還不清楚，需要更深入的研究。 TLR（Toll-like receptors，Toll樣受體）是一類在人體內(nèi)廣泛存在的并且高度保守的重要的模式識別受體，能夠識別并結(jié)合病原相關(guān)分子模式（PAMP），在天然免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。近來研究表明，多種腫瘤細(xì)胞中也有TLR表達(dá)，，并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤與轉(zhuǎn)移具有一定相關(guān)性，但目前對其作用機(jī)制尚不清楚。 實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，TLR2和OPN在兩種乳腺癌細(xì)胞MCF-7（低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞）和MDA-MB-231（高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞）中存在差異性表達(dá)， MCF-7細(xì)胞中OPN和TLR2的表達(dá)均低于MDA-MB-231。還有研究表明TLR2和OPN分別在乳腺癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用，那么TLR2對乳腺癌細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移作用是否與OPN有關(guān)系呢？二者又是通過什么機(jī)制相互作用的呢？為了解決以上疑問，本實驗選取MDA-MB-231細(xì)胞（高轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞）為研究對象，通過Pam3CSK4（TLR1-TLR2二聚體的激活劑）和LTA（TLR2的激活劑）激活TLR2信號通路，研究OPN的表達(dá)變化情況，進(jìn)而研究TLR2與OPN在腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，為乳腺癌的臨床治療提供理論依據(jù)。 本論文利用MTT法、細(xì)胞創(chuàng)口愈合實驗、Transwell基質(zhì)膠細(xì)胞侵襲實驗以及軟瓊脂克隆形成實驗等技術(shù)手段，檢測了Pam3CSK4和LTA對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖、遷移、侵襲及非錨定生長能力的影響。結(jié)果表明，Pam3CSK4和LTA的刺激能夠促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖、浸潤與遷移能力。 利用實時定量PCR技術(shù)檢測了乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231在Pam3CSK4和LTA刺激后TLR2和OPN各亞型的基因表達(dá)變化。結(jié)果顯示，Pam3CSK4和LTA的刺激均能顯著提高TLR2基因的表達(dá)，且二者的刺激能夠顯著上調(diào)OPN各亞型基因的表達(dá)。ELISA檢測表明，Pam3CSK4和LTA刺激對iOPN和sOPN蛋白的表達(dá)具有明顯上調(diào)作用。 利用腫瘤轉(zhuǎn)移PCR芯片技術(shù)對腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的84個基因的表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果表明Pam3CSK4和LTA刺激乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231后，影響腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)。 綜上所述，本實驗對OPN介導(dǎo)的TLR2信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231浸潤與轉(zhuǎn)移影響的作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究，并通過腫瘤轉(zhuǎn)移PCR芯片檢測了刺激后腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的差異表達(dá)，為癌細(xì)胞浸潤與轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究提供了新思路，為乳腺癌的臨床檢測和治療提供了基礎(chǔ)資料。
【關(guān)鍵詞】：骨橋蛋白（OPN） Toll樣受體2 乳腺癌細(xì)胞 Pam3CSK4 LTA
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 目錄4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 綜述10-20
• 1. 骨橋蛋白（OPN）的結(jié)構(gòu)特征10-13
• 2. 骨橋蛋白（OPN）與天然免疫13-15
• 3. 骨橋蛋白（OPN）與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)15-18
• 4. 骨橋蛋白（OPN）與腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移18
• 5. 總結(jié)與展望18-20
• 前言20-24
• 第一章 PAM3CSK4 和 LTA 刺激對人乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力的影響24-35
• 1．實驗材料與試劑24-25
• 2．實驗方法25-29
• 2.1 人乳腺癌細(xì)胞株培養(yǎng)25
• 2.2 細(xì)胞增殖活力檢測25-26
• 2.3 細(xì)胞創(chuàng)口愈合實驗26-27
• 2.4 Transwell 基質(zhì)膠細(xì)胞侵襲實驗27-28
• 2.5 軟瓊脂克隆形成實驗28-29
• 3．實驗結(jié)果29-34
• 3.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對人乳腺癌細(xì)胞增殖活力的影響29-31
• 3.2 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對 MDA-MB-231 細(xì)胞遷移能力的影響31-32
• 3.3 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對 MDA-MB-231 細(xì)胞侵襲能力的影響32-33
• 3.4 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對 MDA-MB-231 細(xì)胞非錨定生長能力的影響33-34
• 4. 本章小結(jié)34-35
• 第二章 PAM3CSK4 和 LTA 刺激對 OPN、TLR2 表達(dá)的影響35-43
• 1. 實驗材料與試劑35-36
• 2. 實驗方法36-40
• 2.1 利用 Trizol 法提取 MDA-MB-231 細(xì)胞的總 RNA36-37
• 2.2 反轉(zhuǎn)錄37-38
• 2.3 實時定量 PCR（Real-time PCR）38-39
• 2.4 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）39-40
• 3．實驗結(jié)果40-42
• 3.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對 OPN 各亞型以及 TLR2 基因表達(dá)的影響40-41
• 3.2 Pam3CSK4 和 LTA 刺激對 MDA-MB-231 細(xì)胞中 OPN 蛋白表達(dá)的影響41-42
• 4. 本章小結(jié)42-43
• 第三章 利用腫瘤轉(zhuǎn)移 PCR 芯片檢測 PAM3CSK4 和 LTA 刺激后乳腺癌細(xì)胞中腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)變化43-61
• 1．實驗材料與試劑43-44
• 2．實驗方法44-49
• 2.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-23144
• 2.2 總 RNA 提取44-45
• 2.3 RNA 質(zhì)量檢測45-46
• 2.4 cDNA 合成46-48
• 2.5 實時定量 PCR（Real-Time PCR）48-49
• 2.6 結(jié)果數(shù)據(jù)分析49
• 3．實驗結(jié)果49-60
• 3.1 RNA 完整性程度的檢測49-51
• 3.2 對 PCR 產(chǎn)物的特異性分析51-52
• 3.3 腫瘤轉(zhuǎn)移 PCR 芯片分析52-60
• 4. 本章小結(jié)60-61
• 討論61-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 附錄 1 主要儀器設(shè)備73-74
• 附錄 2 英文縮寫詞74-75
• 致謝75

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗麗;邵淑麗;武燕;;OPN和B7-H4在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)及意義[J];癌癥;2010年01期

2 解華;鄭榮生;;骨橋蛋白表達(dá)與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年11期

3 徐沛然;楊志廣;姚憲章;邵國光;;骨橋蛋白反義基因在食管癌浸潤與轉(zhuǎn)移中的作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

4 段波;靳風(fēng)爍;;骨橋蛋白與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移[J];重慶醫(yī)學(xué);2007年19期

5 章雪林;薛松;鄭家豪;劉沙;;非小細(xì)胞肺癌中骨橋蛋白和P21的相關(guān)性研究[J];中國肺癌雜志;2007年04期

6 魏少峰,郜玉峰,李旭,桂淑玉,汪淵,江曉平,李家斌;骨橋蛋白和P21在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];實用肝臟病雜志;2005年02期

7 付維;王琪;;骨橋蛋白與腫瘤[J];國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2007年06期

8 趙靜麗;季峰;;胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)促移動因子研究進(jìn)展[J];國際消化病雜志;2009年03期

9 周紅;許文;陳小娥;;瘢痕疙瘩同位素治療方法的臨床研究[J];東南國防醫(yī)藥;2013年04期

10 崔永奇;耿沁;顧愛琴;朱淼鑫;孔韓衛(wèi);孫磊;劉蕾;閆明霞;姚明;;肺腺癌骨轉(zhuǎn)移裸小鼠模型的建立及MicroCT觀察[J];中國肺癌雜志;2013年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙海霞;Ying Li;Yuzhong Wang;Jing Zhang;Xiaoming Ouyang;Renxiu Peng;Jing Yang;;蜈蚣糖肽抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性的研究(英文)[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（上冊，大會報告）[C];2013年

2 Xuejun Jiang;Zunzhen Zhang;;Sodium arsenite and arsenic trioxide differently affect the oxidative stress,genotoxicity and apoptosis in A549 cells:an implication for the paradoxical mechanism[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（下冊，墻報P25-P48）[C];2013年

3 劉敏霞;周可成;曹毅;;新的肺癌相關(guān)基因MCRS1病理生理功能研究[A];第十六屆中國科協(xié)年會——分3環(huán)境污染及職業(yè)暴露與人類癌癥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2014年

4 鄧勇;張煒飛;張成斌;林金明;;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法定量檢測前列腺癌細(xì)胞肌氨酸代謝[A];中國化學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會摘要集——第38分會：質(zhì)譜分析[C];2014年

5 王彩蓮;;肺癌抗血管生成的治療機(jī)制及最新進(jìn)展[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

6 支修益;;亞肺葉切除治療早期肺癌[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 張蕾;王崇薇;史天陸;張圣雨;孫言才;姜玲;;2004-2013年我院腫瘤患者嚴(yán)重藥品不良反應(yīng)分析[A];第十三屆全國青年藥師成才之路論壇暨抗腫瘤藥物合理應(yīng)用與臨床藥學(xué)實踐國家級繼教會議論文集[C];2014年

8 鄧勇;張煒飛;張成斌;林金明;;姜黃素對前列腺癌細(xì)胞肌氨酸代謝和AR/TMPRSS2-ERG信號通路的影響[A];中國化學(xué)會首屆全國質(zhì)譜分析學(xué)術(shù)研討會會議論文集[C];2014年

9 王艷杰;郭雋馥;吳天石;姚輝;孫玲玲;李靜儒;何濤;柳春;;LPS誘導(dǎo)SPCA1細(xì)胞TLR4表達(dá)變化及參苓白術(shù)散含藥血清的干預(yù)作用[A];第四次中華中醫(yī)藥科技成果論壇論文集[C];2014年

10 謝蕓;王文杰;;肺癌患者手術(shù)后心律失常原因及護(hù)理對策分析[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會（廣州站）論文綜合刊[C];2015年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方晨;Her2全人源抗體的制備及生物學(xué)功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 汪子書;人胃癌轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)microRNAs的篩選及其功能鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 孫長宇;乙肝病毒X基因在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)制[D];鄭州大學(xué);2011年

4 盧震亞;TOLL樣受體9在胃癌中的表達(dá)及其在發(fā)病機(jī)制中作用的研究[D];浙江大學(xué);2011年

5 楊桂文;骨橋蛋白（OPN）在Toll樣受體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移過程中作用機(jī)制的研究[D];山東師范大學(xué);2011年

6 周珍珍;MTDH/AEG-1在肝癌靶向性肺轉(zhuǎn)移中的作用和分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

7 劉希勝;骨橋蛋白及其反義基因?qū)Ω伟┘?xì)胞浸潤的生物學(xué)行為實驗研究[D];蘇州大學(xué);2004年

8 唐紅衛(wèi);OPN在胃癌中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 胡智;肺癌相關(guān)差異表達(dá)基因osteopontin和DLC-1在肺癌發(fā)生演進(jìn)中的生物學(xué)作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

10 劉秀峰;基因芯片聯(lián)合組織芯片探討原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣佳凱;人宮頸癌基因（HCCR）對胰腺癌PANC1細(xì)胞腫瘤生物學(xué)行為的影響及其上游信號調(diào)控機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 范造鋒;c-Met及OPN在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2010年

3 劉月賓;TLR4及NF-κBp65在食管癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

4 李小軍;OPN、ⅡA sPLA2、ZO-1及Occludin在胃黏膜上皮內(nèi)瘤變和胃癌內(nèi)鏡活檢組織中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

5 陳曉儀;骨橋蛋白基因多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

6 陳韋君;P21與c-myc在宮頸病變中的表達(dá)及臨床意義[D];南昌大學(xué);2011年

7 張龍;骨橋蛋白在泡狀棘球蚴侵襲性生長中的作用和應(yīng)用研究[D];石河子大學(xué);2011年

8 劉海建;OPN、uPA及MMP-9的蛋白表達(dá)與垂體腺瘤侵襲性關(guān)系的研究[D];河北大學(xué);2011年

9 尹超偉;骨橋蛋白與基質(zhì)金屬蛋白酶-2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)[D];河北聯(lián)合大學(xué);2011年

10 郜玉峰;骨橋蛋白、P21、CD44v6在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號：1009452