本文關鍵詞：基于馬達蛋白及NGF探尋推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠軸漿運輸功能的影響及機理

  更多相關文章： 機理 馬達蛋白 NGF 推拿 軸漿運輸 周圍神經(jīng)損傷

【摘要】：[目的] 周圍神經(jīng)損傷是臨床的常見病、多發(fā)病,多以感覺、運動功能的障礙為主要癥狀。運用推拿治療相關疾病,在臨床上取得了良好的療效,但其中機理尚未闡明。由于神經(jīng)功能恢復的基礎是軸漿運輸功能的正常,因此本次研究對象選為坐骨神經(jīng)夾持損傷模型大鼠,以模擬臨床中周圍神經(jīng)的壓迫損傷,在通過推拿給予定時、定性、定量的干預后,以行為學、形態(tài)學作為療效評價的指標,從馬達蛋白及神經(jīng)生長因子在脊髓中表達的變化,探索推拿促進軸漿運輸功能恢復的機理,為臨床應用推拿治療周圍神經(jīng)損傷疾病,改善患者的癥狀及預后提供有力科學證據(jù)。 [方法] 采用SD大鼠,進行坐骨神經(jīng)夾持損傷造模,選取患側“穴位-神經(jīng)-肌肉區(qū)域”中的殷門、承山、陽陵泉三穴進行推拿治療,從行為學角度,通過對其光熱耐痛閾和斜板試驗的檢測,評價推拿治療后神經(jīng)和肌肉的感覺、運動恢復情況；從形態(tài)學角度,通過對其脊髓、損傷點神經(jīng)、肌肉的染色觀察,探尋推拿促進神經(jīng)元再生修復的證據(jù)；并進而通過檢測脊髓中馬達蛋白的表達,評價推拿對軸漿運輸功能動力支持的影響；檢測脊髓中動力蛋白激活蛋白與神經(jīng)生長因子的表達,找尋推拿促進軸漿運輸功能恢復的證據(jù),最終進一步理清推拿治療坐骨神經(jīng)損傷的作用機理和起效途徑等。 [結果] 1.行為學 光熱耐痛閾結果如下：造模7d后、推拿治療10次、20次后,左側(健側)光熱耐痛閾各組間均無差異；造模7d后右側(患側)光熱耐痛閾,模型組與正常組相比均有明顯差異(P0.05),說明坐骨神經(jīng)損傷后,大鼠的感覺功能減退,敏感度降低。推拿治療10次、20次后,大鼠右側光熱耐痛閾推拿治療組與模型組和模型對照組相比均有降低(P0.05),痛敏分數(shù)推拿治療組與模型組相比有顯著性降低(P0.01),說明推拿可以促進坐骨神經(jīng)損傷大鼠感覺功能的恢復。 斜板試驗結果表明,造模7d后模型組與正常組相比有明顯差異(p0.05),說明坐骨神經(jīng)損傷后,大鼠的運動功能減退,肌力降低,造模成功。推拿治療10次后,推拿治療組與模型組和模型對照組相比均有顯著性升高(p0.05),且已接近正常組水平。推拿治療20次后,推拿治療組已達到甚至超過正常組水平,且與模型組和模型對照組相比仍有顯著性差異(p0.05),可能與推拿幫助改善肌力的功效有關。說明推拿可以有效促進坐骨神經(jīng)損傷大鼠運動功能和下肢肌力的恢復。 2.形態(tài)學 腓腸肌濕重結果如下：造模7d后、推拿治療10次、20次后,各組大鼠左側腓腸肌濕重均沒有差異。造模7d后,假手術組與模型組大鼠患側腓腸肌濕重均有一定程度的降低,且模型組更為明顯,模型組與正常組和假手術組相比,其腓腸肌濕重和腓腸肌恢復率顯著性降低(P0.05),說明假手術組單純肌肉的剝離對肌肉產(chǎn)生了一定的影響。推拿治療10次后,推拿治療組大鼠腓腸肌濕重和腓腸肌恢復率均有升高,且與模型組和模型對照組有顯著性差異(P0.05),但各組大鼠的腓腸肌濕重和恢復率與正常組相比仍存在差異(P0.05)。推拿治療20次后,推拿治療組大鼠腓腸肌濕重和恢復率仍高于模型組和模型對照組,但與正常組相比仍有一定差距(P0.05) 造模7d后,模型組右側腓腸肌肌細胞直徑明顯小于正常組和假手術組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。推拿治療10次后,推拿治療組大鼠右側腓腸肌肌細胞直徑有一定程度增大,且與模型組和模型對照組比較存在顯著差異(P0.05),但與正常組相比仍然較低(P0.05)。推拿治療20次后,各組大鼠右側腓腸肌肌細胞直徑皆逐漸升高,且推拿治療組明顯優(yōu)于模型組和模型對照組(P0.05),但尚未達到正常組水平。 脊髓HE染色結果：正常情況下,脊髓腹角神經(jīng)元細胞排列整齊,細胞核位于細胞中央,核仁清晰,尼氏體均勻分布；模型組脊髓腹角神經(jīng)元排列不規(guī)則,數(shù)量減少,細胞出現(xiàn)腫脹、變性等現(xiàn)象,染色較淺,胞核移向邊緣,尼氏體溶解消失；經(jīng)推拿治療后,脊髓腹角神經(jīng)元變性、損傷程度較輕,排列較規(guī)則,部分細胞核移向邊緣,可見少量細胞核再生。 坐骨神經(jīng)HE染色結果：正常情況下,神經(jīng)元軸突及雪旺細胞排列整齊；模型組部分神經(jīng)元軸突及雪旺細胞排列不規(guī)則,出現(xiàn)腫脹、破潰,甚至崩裂,而被巨噬細胞吞噬,膠質(zhì)細胞出現(xiàn)明顯增生；經(jīng)推拿治療后雪旺細胞及軸突基本正常。 腓腸肌HE染色結果：正常情況下,腓腸肌細胞大小一致,排列整齊,胞核清晰,胞漿染色均勻,肌纖維間隙適中；模型組腓腸肌肌細胞直徑明顯縮小,分布不均勻,胞核清晰,但數(shù)量明顯增多,肌纖維間隙增大,呈現(xiàn)萎縮現(xiàn)象；經(jīng)推拿治療后腓腸肌肌細胞直徑較均勻,胞核清晰,肌纖維萎縮程度較輕。 3.機理研究 正常組及假手術組大鼠馬達蛋白(動力蛋白Dynein,驅(qū)動蛋白Kinesin、動力蛋白激活蛋白Dynactin)、NGF在脊髓中均有少量表達,陽性神經(jīng)元的胞核呈藍色,胞漿呈棕褐色；造模7d后,模型組大鼠以上研究指標在脊髓中的表達均較正常組和假手術組染色加深,免疫組化的平均光密度亦增高,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；推拿治療10次后,模型組、模型對照組及推拿治療組大鼠脊髓中Dynein、Kinesin、Dynactin、NGF的免疫組化平均光密度均較正常組顯著增高,且推拿治療組的染色范圍和程度明顯優(yōu)于模型組,與其余四組比較均具有統(tǒng)計學意義；推拿治療20次后,在脊髓中推拿治療組的馬達蛋白及NGF的表達與其余四組比較仍有顯著性差異,而Dynactin在推拿組中的表達亦維持在較高水平,但是模型組中的表達卻降低到與正常組無顯著性差異的水平,結合模型組大鼠的行為學表現(xiàn),推斷模型組大鼠的逆向軸漿運輸功能發(fā)生障礙,因此即使NGF能夠高表達,也無法被及時轉運至神經(jīng)元胞體,從而導致周圍神經(jīng)的損傷沒有得到及時修復。考慮到受治療時間的限制,按實驗結果分析,如果繼續(xù)治療,當受損神經(jīng)恢復到一定程度,Kinesin及Dynein的表達會逐漸降低,趨于正常。模型組中的表達情況也是如此,但推拿組的軸漿運輸功能會得到改善。因而在最終比較時,雖然Kinesin及Dynein的表達在推拿組與模型組間比較無顯著性差異,但是大鼠的行為學會出現(xiàn)較大差異,即推拿組要明顯優(yōu)于模型組。這得益于通過推拿,提高了脊髓中馬達蛋白的表達,促進了軸漿運輸功能的恢復。 [結論] 1推拿可以提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠腓腸肌的肌肉恢復率以及肌力,并能提升大鼠的痛覺敏感程度,從而促進坐骨神經(jīng)損傷大鼠運動和感覺功能的恢復； 2推拿能夠提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓中馬達蛋白的表達,為軸漿運輸功能的恢復提供了動力基礎,為神經(jīng)元與靶器官之間建立了營養(yǎng)傳遞通路； 3推拿能夠提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓中動力蛋白激活蛋白與神經(jīng)生長因子的表達,為神經(jīng)元的存活與再生、受損軸突的出芽與生長提供營養(yǎng)保障。 4從馬達蛋白動力層面促進軸漿運輸?shù)陌l(fā)生,并進而從神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)傳遞層面改善軸漿運輸?shù)墓δ?應該為推拿治療周圍神經(jīng)損傷的起效機理之一
【關鍵詞】：機理 馬達蛋白 NGF 推拿 軸漿運輸 周圍神經(jīng)損傷
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R244.1
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 英文~.略詞12-13
• 文獻綜述13-39
• 綜述一、中西醫(yī)對周圍神經(jīng)損傷的認識13-21
• 1 周圍神經(jīng)損傷的中醫(yī)學研究現(xiàn)狀13-16
• 1.1 病因概述13-14
• 1.2 病機分析14
• 1.3 治療方法14-16
• 1.4 機理初探16
• 2 周圍神經(jīng)損傷的西醫(yī)學研究現(xiàn)狀16-21
• 2.1 病因概述16-17
• 2.2 主要癥狀17
• 2.3 治療手段17-19
• 2.4 機理初探19-21
• 綜述二、推拿治療周圍神經(jīng)損傷的相關研究21-29
• 1 推拿治療周圍神經(jīng)損傷的臨床研究21-25
• 1.1 推拿治療神經(jīng)根型頸椎病21-22
• 1.2 推拿治療腰椎間盤突出癥22-23
• 1.3 推拿治療臀上皮神經(jīng)炎23-24
• 1.4 推拿治療臂叢神經(jīng)損傷24
• 1.5 推拿治療腕管綜合征24-25
• 2 推拿治療周圍神經(jīng)損傷的實驗研究25-29
• 綜述三、軸漿運輸功能在周圍神經(jīng)修復過程中的作用研究29-33
• 1 周圍神經(jīng)修復所依賴的微觀環(huán)境29
• 2 周圍神經(jīng)成功修復的微觀標志29-30
• 3 軸漿運輸?shù)南嚓P研究30-33
• 3.1 軸漿運輸?shù)膭恿碓?/span>30-31
• 3.2 軸漿運輸障礙的發(fā)生機制31
• 3.3 軸漿運輸功能的重建31-33
• 綜述四、NGF促進周圍神經(jīng)修復的機理研究33-37
• 1 NGF相關概述33-34
• 1.1 NGF的發(fā)現(xiàn)與結構33
• 1.2 NGF的分布與表達33-34
• 1.3 NGF的生物學效應34
• 2 周圍神經(jīng)損傷涉及NGF的相關研究34-36
• 3 NGF修復損傷神經(jīng)的機理36-37
• 綜述小結37-39
• 前言39-41
• 材料和方法41-50
• 實驗一、推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠的行為學影響41-43
• 實驗二、推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠的形態(tài)學影響43-45
• 實驗三、從馬達蛋白表達的變化研究推拿對軸漿運輸恢復的作用45-49
• 實驗四、從Dynactin及NGF探尋推拿促進軸漿運輸恢復的機理49-50
• 整體技術路線圖50-51
• 結果51-69
• 討論69-79
• 結論79-81
• 參考文獻81-89
• 致謝89-91
• 個人簡歷91-93
• 附件93-99

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