發(fā)布時(shí)間：2017-02-23 17:10

  本文關(guān)鍵詞：肩部電針與康復(fù)訓(xùn)練治療肩撞擊綜合征的療效比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第二軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

siRNA雙靶向干擾IL-1β/TNF-α治療肩袖疾病患者肩峰下滑囊炎的實(shí)驗(yàn)研究

眭杰  

【摘要】：肩袖疾�。╮otator cuff disease, RCD）是引起肩周疼痛、肩關(guān)節(jié)功能障礙的最常見(jiàn)原因。隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，我們對(duì)于肩袖疾病形成機(jī)理及有了更深入的認(rèn)識(shí)。逐漸認(rèn)識(shí)到：肩峰下滑囊炎（subacromial bursitis）是導(dǎo)致肩袖疾病患者肩痛及功能障礙的重要原因。肩峰下滑囊細(xì)胞是肩峰下滑囊炎的核心細(xì)胞，非特異性刺激（機(jī)械牽拉、缺氧、炎性細(xì)胞及臨近肩袖腱細(xì)胞）可通過(guò)囊壁上的壓力或化學(xué)感受器刺激其分泌IL-1、TNF-α，MMP-1、MMP-9、COX-1、COX-2、SDF-1、P物質(zhì)及VEGF多種炎性因子形成了一個(gè)調(diào)控慢性炎癥反應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)，而IL-1β及TNF-α是這個(gè)炎性網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵因子。遺憾的是，盡管大理的研究都證實(shí)了這些細(xì)胞因子對(duì)肩峰下滑囊炎的起病與發(fā)展起到了十分重要的作用，但大都僅局限在機(jī)制的探討上，尚未有應(yīng)用這些因子治療肩袖疾病患者肩峰下滑囊炎的相關(guān)報(bào)道。 小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)是含有21～23bp的雙鏈RNA,可以序列特異性地切割靶RNA,介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后基因沉默，抑制蛋白質(zhì)的合成，而不誘導(dǎo)非特異性的雙鏈RNA反應(yīng)。近年來(lái)，RNAi作為一種高效的序列特異性基因剔除技術(shù)在基因治療領(lǐng)域發(fā)展極為迅速。到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚未有應(yīng)用RNAi技術(shù)肩袖疾病的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中，我們利用siRNA雙靶向干擾肩峰下滑囊細(xì)胞的IL-1β及TNF-α基因，評(píng)價(jià)IL-1β及TNF-α基因剔降效果及對(duì)這個(gè)炎性網(wǎng)絡(luò)中其它炎性因子的影響。 目的 旨在明確肩峰下滑囊細(xì)胞類型及病理特征；探討利用RNAi手段沉默人肩峰下滑囊細(xì)胞IL-1β及TNF-α基因的可行性；評(píng)價(jià)IL-1β及TNF-α基因剔降效果及對(duì)這個(gè)炎性網(wǎng)絡(luò)中其它炎性因子的影響；進(jìn)一步揭示肩袖疾病肩峰下滑囊炎發(fā)病機(jī)制及IL-1β及TNF-α在其炎性環(huán)路中的作用；為肩袖疾病臨床治療、未來(lái)基因治療及藥物篩選提供重要理論依據(jù)。 方法 1.取肩袖疾病患者肩峰下滑囊標(biāo)本，，通過(guò)平面培養(yǎng)的方法，采用改良雙酶消化法分離、體外培養(yǎng)、純化肩峰下滑囊細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)，通過(guò)H-E染色、Vimentin及CD68免疫熒光染色鑒定明確細(xì)胞類型。 2.設(shè)計(jì)合成針對(duì)人IL-1β基因序列特征設(shè)計(jì)特異siRNA-(1-3)，及針對(duì)人TNF-α基因序列特征設(shè)計(jì)特異siRNA-(a-c)，以陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體，轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的肩峰下滑囊細(xì)胞；FAM熒光標(biāo)記，測(cè)定轉(zhuǎn)染率，觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)。Westen blot篩選出針對(duì)IL-1β及TNF-α基因的有效siRNA序列，進(jìn)一步通過(guò)Realtime-PCR檢測(cè)siRNA抑制肩峰下滑囊細(xì)胞IL-1β及TNF-α基因表達(dá)效果及劑量、時(shí)間相關(guān)性。 3.利用篩選出的針對(duì)IL-1β及TNF-α基因的有效siRNA序列，雙靶向干擾肩峰下滑囊細(xì)胞，Realtime-PCR檢測(cè)IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-9、COX-1、COX-2及SDF-1等細(xì)胞因子表達(dá)水平，以不加siRNA的滑囊細(xì)胞做空白對(duì)照，評(píng)價(jià)IL-1β及TNF-α基因剔降后對(duì)這個(gè)炎性網(wǎng)絡(luò)中其它炎性因子的影響。 結(jié)果 1.人肩峰下滑囊原代細(xì)胞貼壁良好。傳至第3代后以長(zhǎng)梭形細(xì)胞均勻生長(zhǎng)。HE染色，普通光鏡下，細(xì)胞呈梭型，核呈圓形，較大，核仁明顯，免疫熒光結(jié)果顯示Vimentin陽(yáng)性，CD68陰性，符合成纖維樣滑膜細(xì)胞特征。 2. FAM熒光標(biāo)記后測(cè)定轉(zhuǎn)染率都在80％以上，觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)均無(wú)明顯影響；Westen blot結(jié)果顯示IL-1β-siRNA-2及TNF-α-siRNA-c相對(duì)基因抑制水平最強(qiáng)；Realtime-PCR檢測(cè)顯示siRNA抑制肩峰下滑囊成纖維樣滑膜細(xì)胞IL-1β及TNF-α基因表達(dá)時(shí)存在相似的劑量、時(shí)間相關(guān)性，隨siRNA終濃度增加，抑制效率增強(qiáng)；轉(zhuǎn)染后24h抑制最強(qiáng)，48h后逐漸減弱。 3. siRNA-2、siRNA-c均以終濃度200nmol／L同時(shí)轉(zhuǎn)染肩峰下滑囊成纖維樣滑膜細(xì)胞，以不加siRNA的滑囊細(xì)胞做空白對(duì)照，Realtime-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染后IL-1β及TNF-α的表達(dá)被明顯抑制。MMP-1、MMP-9、COX-1的抑制效果同對(duì)照組相比有顯著差異， COX-2、SDF-1的抑制效雖不顯著，但仍有抑制。 結(jié)論 1.采用改良雙酶消化法可成功擴(kuò)增并獲得相當(dāng)數(shù)量的肩峰下滑囊細(xì)胞。 2.經(jīng)鑒定，肩峰下滑囊細(xì)胞培養(yǎng)至第3代為純度較高的成纖維樣滑膜細(xì)胞。 3.化學(xué)合成的IL-1β、TNF-α特異siRNA通過(guò)脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染可以有效抑制肩峰下滑囊成纖維樣滑膜細(xì)胞IL-1β、TNF-α基因的表達(dá)。 4. siRNA抑制肩峰下滑囊成纖維樣滑膜細(xì)胞IL-1β及TNF-α基因均存在良好的劑量、時(shí)間相關(guān)性。 5.利用siRNA雙靶向干擾技術(shù)可成功剔降IL-1β、TNF-α基因的表達(dá)，并同時(shí)下調(diào)了炎性網(wǎng)絡(luò)中炎性因子MMP-1、MMP-9、COX-1、COX-2及SDF-1的表達(dá)。對(duì)炎性網(wǎng)絡(luò)有明確的抑制作用。 6.從另一面證實(shí)了在肩峰下滑囊炎炎性網(wǎng)絡(luò)中，IL-1β、TNF-α作為關(guān)鍵因子與其它炎性因子存在正反饋關(guān)系。 7.應(yīng)用RNAi技術(shù)對(duì)肩峰下滑囊炎慢性炎癥反應(yīng)環(huán)路中的多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行調(diào)控可能是未來(lái)治療肩峰下滑囊炎乃至肩袖疾病的有效途徑。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R686
【目錄】：

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【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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【同被引文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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5 張和英;;針刺合刺絡(luò)拔罐法治療肩峰下滑囊炎36例[J];貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年06期

6 周立武;;燔針劫刺治療肩峰下滑囊炎臨床觀察[J];上海針灸雜志;2009年07期

7 許鑫;許易;金志旦;楊威斌;歐陽(yáng)宏偉;;超聲引導(dǎo)下注射療法治療運(yùn)動(dòng)員肩峰下滑囊炎的臨床研究[J];浙江體育科學(xué);2010年05期

8 錢小燕;透刺法為主治療肩峰下滑囊炎[J];中國(guó)針灸;2001年11期

9 邢更彥,劉玉祥,姚建萍,盧蘭勤;應(yīng)用體外沖擊波碎石技術(shù)治療肩部軟組織慢性損傷性疾病[J];中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué);1996年03期

10 劉傳芳;治療肩周炎的好辦法[J];家庭醫(yī)學(xué);1996年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 劉春山;劉洪強(qiáng);尚軍;高慶霞;趙瑞國(guó);;運(yùn)用“長(zhǎng)圓針”治療320例“肩峰下滑囊炎”臨床觀察[A];中國(guó)針灸學(xué)會(huì)經(jīng)筋診治專業(yè)委員會(huì)2010學(xué)術(shù)年會(huì)暨第二屆中華經(jīng)筋醫(yī)學(xué)論壇論文集[C];2010年

2 孫啟良;;關(guān)于肩關(guān)節(jié)周圍炎的一些新概念[A];第六次全國(guó)運(yùn)動(dòng)療法學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2002年

3 張盛強(qiáng);;手法推拿治療肩周炎[A];第九次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合創(chuàng)傷骨科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2001年

4 施園;;肩關(guān)節(jié)周圍炎病因的研究進(jìn)展[A];2011浙江省針灸學(xué)會(huì)年會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年

5 楊迪和;潘青春;王文遠(yuǎn);;平衡針灸治療肩周炎246例[A];第四次全國(guó)民間傳統(tǒng)診療技術(shù)與驗(yàn)方整理研究學(xué)術(shù)會(huì)論文集[C];2011年

6 王勇;;手法治療肩周炎與肩部解剖結(jié)構(gòu)的關(guān)系[A];第十二次全國(guó)推拿學(xué)術(shù)年會(huì)暨推拿手法調(diào)治亞健康臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2011年

7 熊茂林;尹久;;從肩胛帶肌著眼對(duì)頸椎病肩周炎診治的再認(rèn)識(shí)[A];第十二次全國(guó)推拿學(xué)術(shù)年會(huì)暨推拿手法調(diào)治亞健康臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2011年

8 吳飛;韋英才;梁樹(shù)勇;;壯醫(yī)經(jīng)筋療法治療岡上肌肌腱炎療效觀察[A];第十二次全國(guó)推拿學(xué)術(shù)年會(huì)暨推拿手法調(diào)治亞健康臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 ;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

2 王展;[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

3 劉長(zhǎng)信;[N];健康報(bào);2005年

4 本報(bào)記者 王敬霞;[N];保健時(shí)報(bào);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 眭杰;siRNA雙靶向干擾IL-1β/TNF-α治療肩袖疾病患者肩峰下滑囊炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 許峰源;一指刀配合條口透承山治療肩關(guān)節(jié)周圍炎的療效觀察[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 彭宇飛;改良針刀治療肩周炎的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

相關(guān)機(jī)構(gòu)

>廣州中醫(yī)藥大學(xué)

>黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)

>第二軍醫(yī)大學(xué)

相關(guān)作者

>許峰源 >眭杰

>彭宇飛

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  本文關(guān)鍵詞：肩部電針與康復(fù)訓(xùn)練治療肩撞擊綜合征的療效比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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