目的:孕烷X受體（pregnane X receptor,PXR）作為核受體（nuclear receptor,NR）超家族成員之一,廣泛分布在肝臟、腸、腎臟中,參與體內(nèi)眾多藥物代謝酶及轉運體的調(diào)控,在機體內(nèi)內(nèi)源性和外源性物質和藥物的吸收、分布、代謝及排泄等過程中扮演重要角色。前期實驗室構建了基于分泌型Gaussia熒光素酶報告基因PXR-CYP3A4通路的穩(wěn)定工程細胞株并成功用于PXR激活效應的快速篩選,發(fā)現(xiàn)丹參中主要有效脂溶性成分丹參酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）具有明顯的PXR激活效應,同時Tan ⅡA亦被證實具有明顯的心血管保護效應。近來文獻報道PXR除了在肝臟表達外,在心血管系統(tǒng)中也有大量表達,那么Tan ⅡA的潛在藥理效應及其心血管保護作用是否與其激活PXR有關。因此,本課題主要是基于PXR研究Tan ⅡA血管保護的效應機制。依據(jù)PXR效應的篩選結果,首先通過人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial,HUVECs）細胞為載體,進一步確證Tan ⅡA對PXR表達以及活性的影響,利用過氧化氫（hydrogen pero...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

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英文縮略詞
摘要
Abstract
第一部分 丹參酮ⅡA對HUVECs中PXR的激活作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設備
        2.3 細胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 CCK-8 檢測HUVECs細胞活力
        2.6 q RT-PCR檢測PXR和CYP3A4的mRNA表達
        2.7 Western-blot檢測PXR的蛋白表達
        2.8 siRNA轉染PXR基因
        2.9 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 丹參酮ⅡA和H₂O₂對HUVECs細胞活力的影響
        3.2 丹參酮ⅡA對HUVECs細胞PXR mRNA和蛋白的影響
        3.3 丹參酮ⅡA對HUVECs細胞CYP3A4 mRNA影響
    4 討論
第二部分 丹參酮ⅡA通過激活PXR保護H₂O₂誘導的細胞氧化損傷
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設備
        2.3 細胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 CCK-8 檢測HUVECs細胞活力
        2.6 HUVECs細胞形態(tài)學觀察
        2.7 流式細胞術檢測HUVECs細胞ROS含量
        2.8 ELISA檢測HUVECs細胞GSH和GSSG含量
        2.9 qRT-PCR檢測HUVECs細胞PXR、MDR1、GST、GPx和GSTM1 mRNA表達
        2.10 siRNA轉染HUVECs細胞PXR基因
        2.11 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 丹參酮ⅡA和H₂O₂對HUVECs細胞形態(tài)的影響
        3.2 PXR在丹參酮ⅡA保護H₂O₂誘導的HUVECs細胞損傷的作用
        3.3 PXR對丹參酮ⅡA誘導的代謝酶和抗氧化酶基因表達的影響
        3.4 PXR對丹參酮ⅡA誘導的抗氧化酶蛋白表達的影響
    4 討論
第三部分 丹參酮ⅡA激活PXR保護H₂O₂誘導的細胞凋亡和炎癥
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設備
        2.3 細胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 細胞凋亡檢測
        2.6 線粒體膜電位檢測
        2.7 細胞Caspace3/7、8、9 檢測
        2.8 Hoechst 33342 凋亡形態(tài)學檢測
        2.9 Western-blot檢測凋亡信號分子
        2.10 高內(nèi)涵檢測凋亡誘導因子(AIF)的易位
        2.11 DNA fragment檢測
        2.12 丹參酮ⅡA對H₂O₂誘導HUVECS細胞粘附的影響
        2.13 PXR對丹參酮ⅡA保護H₂O₂誘導HUVECS細胞IL-8 的影響
        2.14 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 PXR對H₂O₂誘導的HUVECs細胞凋亡的影響
        3.2 丹參酮ⅡA對H₂O₂損傷的細胞核和Caspase酶的影響
        3.3 PXR對H₂O₂誘導的HUVECs細胞凋亡信號分子的影響
        3.4 高內(nèi)涵檢測丹參酮ⅡA對凋亡誘導因子核內(nèi)移位的影響
        3.5 丹參酮ⅡA對H₂O₂誘導的HUVECs細胞DNA fragment的影響
        3.6 Tan ⅡA對H₂O₂誘導HUVECS細胞粘附的影響
        3.7 PXR對丹參酮ⅡA保護H₂O₂誘導HUVECS細胞炎癥的影響
    4 討論
結論
參考文獻
附錄 個人簡歷
致謝
綜述 PXR/CYP的生物學特性及參與體內(nèi)代謝的作用
    參考文獻



本文編號：4023033