目的1.對(duì)LPS刺激后的DC2.4成熟性進(jìn)行鑒定,確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性與可行性。2.青藤堿作用于成熟DC2.4后,觀察細(xì)胞內(nèi)SOCS1、JAK2、STAT1蛋白與基因含量變化及上清液中IFN-γ、IL-6、IL-10含量變化,探討青藤堿對(duì)DC2.4細(xì)胞內(nèi)JAK/STAT信號(hào)通路的磷酸化作用機(jī)制,及其治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎機(jī)制,為治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎尋找新的治療靶點(diǎn)。方法1.通過(guò)形態(tài)學(xué)及細(xì)胞膜上表型CD11C、CD80及CD86判定DC2.4成熟狀態(tài)。2.將DC2.4細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并分為A、B、C三組,A組為空白組,B組為模型組,C組為青藤堿組。A組不做處理,B組、C組分別經(jīng)5μg/m L的LPS刺激培養(yǎng)24h,使DC2.4成熟,C組中繼續(xù)加入40μg/mL的青藤堿,A組、B組不做進(jìn)一步處理,繼續(xù)培養(yǎng)三組細(xì)胞48h。Rt-PCR法檢測(cè)三組細(xì)胞中SOCS1、JAK2、STAT1基因表達(dá);Western Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中SOCS1、JAK2、STAT1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表達(dá);取上清液,ELISA法檢測(cè)炎癥因子IFN-γ、IL-6、IL-10含量。結(jié)果1.DC2.4成熟性鑒定(1)...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫(xiě)
序論
實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖
第一章 DC2.4誘導(dǎo)成熟與鑒定
    1.前言
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑和配置方法
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 DC2.4培養(yǎng)與分組
        3.2 DC2.4的活力鑒定
        3.3 DC2.4表面標(biāo)志物檢測(cè)
        3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.結(jié)果
        4.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析
        4.2 細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)
    5.討論
    6.小結(jié)
第二章 青藤堿對(duì)DC2.4JAK/STAT信號(hào)通路磷酸化的影響
    1.前言
        1.1 青藤堿研究概況
        1.2 DC與JAK/STAT信號(hào)通路
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 主要試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 Rt-PCR檢測(cè)JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS1的表達(dá)
        3.2 WesternBlot檢測(cè)青藤堿對(duì)成熟DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1及SOCS1蛋白表達(dá)
    4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 Rt-PCR檢測(cè)JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS1的表達(dá)變化
        4.2 WesternBlot檢測(cè)中青藤堿對(duì)成熟DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1及SOCS1蛋白表達(dá)的影響
    5.討論
        5.1 DC與JAK2/STAT1通路
        5.2 DC與SOCS
        5.3 選擇藥物濃度及作用時(shí)間的依據(jù)
    6.小結(jié)
        6.1 青藤堿對(duì)JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS表達(dá)的影響
        6.2 青藤堿對(duì)成熟的DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT及SOCS1蛋白表達(dá)的影響
第三章 青藤堿治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機(jī)制
    1.前言
        1.1 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)認(rèn)識(shí)
        1.2 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 主要試劑及試劑盒
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 分組
        3.2 青藤堿對(duì)DC2.4細(xì)胞分泌炎性因子IL-6、IL-10、IFN-γ含量的影響
        3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 ELISA檢測(cè)DC2.4G細(xì)胞上清中IL-6的含量
        4.2 ELISA檢測(cè)DC2.4細(xì)胞上清中IL-10的含量
        4.3 ELISA檢測(cè)DC2.4細(xì)胞上清中IFN-γ的含量
    5.討論
        5.1 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)中藥治療
        5.2 青藤堿治療類(lèi)風(fēng)關(guān)的研究進(jìn)展
        5.3 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與炎癥
        5.4 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與DC
        5.5 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與JAK/STAT通路
        5.6 SOCS1與RA
        5.7 青藤堿治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的可能機(jī)制
    6.小結(jié)
總論
本研究創(chuàng)新性
存在問(wèn)題及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
在讀期間公開(kāi)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專(zhuān)著及科研成果



本文編號(hào)：3956405