發(fā)布時間：2024-03-21 03:36

　　目的:蓮心總堿(Alkaloids from Nelumbinis Plumula,AFNP)降壓及抑制主動脈重構(gòu)的作用和機制尚不完全清楚�；赗hoA/ROCK通路在調(diào)節(jié)血管收縮舒張及主動脈重構(gòu)中的重要作用,本研究以RhoA/RCOK通路為切入點探討蓮心總堿抗高血壓及抑制主動脈重構(gòu)的作用及分子機制,以期為蓮心總堿的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法:1.采用蓮心總堿對SHR大鼠進行每日灌胃,連續(xù)給藥8周,給藥期間每周進行血壓檢測。2.采用HE染色觀察蓮心總堿對主動脈血管形態(tài)學的影響,計算血管中膜厚度/腔徑(MT/LD)的比值以及中膜面積/管腔面積(MA/LA)的比值。3.采用Masson染色檢測蓮心總堿干預對SHR大鼠主動脈膠原形成的影響。4.采用Western blot檢測蓮心總堿干預對SHR大鼠主動脈血管中Collagen I和α-SMA蛋白表達的影響。5.通過體外血管張力實驗檢測蓮心總堿對去甲腎上腺素(NE,1×10^-66 mol·L^-1)、氯化鉀(KCl,6×10^-22 mol·L^-1)、血管緊張...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞
前言
第一部分 蓮心總堿對SHR大鼠的降壓及抑制主動脈重構(gòu)作用
    1 實驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 蓮心總堿的制備
        1.4 常用試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 動物飼養(yǎng)
        2.2 WKY和SHR的分組及給藥
        2.3 尾動脈法測量大鼠血壓
        2.4 主動脈組織 HE 染色
        2.5 MASSON染色法觀察血管膠原的生成
        2.6 Western blot檢測主動脈α-SMA及Collagen Ⅰ蛋白的表達
    3 實驗結(jié)果
        3.1 蓮心總堿對SHR大鼠收縮壓，舒張壓和平均動脈壓的影響
        3.2 蓮心總堿對SHR大鼠主動脈形態(tài)及血管壁厚度的影響
        3.3 蓮心總堿對SHR大鼠主動脈MT/LD和MA/LA比值的影響
        3.4 蓮心總堿對SHR大鼠主動脈膠原生成的影響
        3.5 蓮心總堿對SHR大鼠主動脈中α-SMA及Collagen Ⅰ表達的影響
    4 小結(jié)
    5 討論
第二部分 蓮心總堿對離體主動脈血管環(huán)的舒張作用及機制研究
    1 實驗材料
        1.1 藥物與藥品
        1.2 試劑
        1.3 儀器
        1.4 常用試劑配制
    2 實驗方法
        2.1 離體主動脈血管環(huán)的制備
        2.2 主動脈血管環(huán)活性及內(nèi)皮完整性檢測
        2.3 蓮心總堿對靜息狀態(tài)下離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        2.4 蓮心總堿對Ang Ⅱ刺激下離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        2.5 蓮心總堿對高鉀刺激下離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        2.6 蓮心總堿對去甲腎上腺素刺激下離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        2.7 L-NAME及吲哚美辛對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        2.8 內(nèi)皮依賴性檢測
        2.9 K_V通道阻斷劑對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        2.10 K_Ca通道阻斷劑對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        2.11 K_ir通道阻斷劑對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        2.12 K_ATP通道阻斷劑對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        2.13 蓮心總堿對CaCl₂誘發(fā)血管收縮的影響
        2.14 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 蓮心總堿對靜息狀態(tài)下大鼠離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        3.2 蓮心總堿對血管緊張素II刺激下大鼠離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        3.3 蓮心總堿對去甲腎上腺素刺激下大鼠離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        3.4 蓮心總堿對高鉀刺激下大鼠離體主動脈血管環(huán)張力的影響
        3.5 L-硝基精氨酸甲酯及吲哚美辛對蓮心總堿舒張血管作用的影響
        3.6 蓮心總堿對去甲腎上腺素預收縮去內(nèi)皮及不去內(nèi)皮血管環(huán)張力的影響
        3.7 電位控制型鉀離子通道阻斷劑對蓮心總堿舒血管作用的影響
        3.8 ATP敏感性鉀通道阻斷劑對蓮心總堿舒血管作用的影響
        3.9 鈣活化型鉀離子通道阻斷劑對蓮心總堿舒血管作用的影響
        3.10 內(nèi)向性整流型鉀離子通道阻斷劑對蓮心總堿舒血管作用的影響
        3.11 蓮心總堿對主動脈外鈣內(nèi)流的影響
    4 小結(jié)
    5 討論
第三部分蓮心總堿對Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌細胞的作用及機制初探
    1 實驗材料
        1.1 細胞株：
        1.2 試劑
        1.3 儀器
        1.4 常用試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 藥物濃度篩選
        2.3 MTT檢測細胞增殖
        2.4 熒光染色法檢測血管平滑肌細胞骨架改變
        2.5 RhoA G-LISA法檢測RhoA的活化
        2.6 Western blot檢測RhoA/ROCK通路蛋白的表達水平
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 蓮心總堿對VSMC細胞活力的影響
        3.2 蓮心總堿對Ang Ⅱ刺激引起的VSMC細胞增殖的影響
        3.3 蓮心總堿對Ang Ⅱ刺激引起的血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化的影響
        3.4 蓮心總堿對Ang Ⅱ刺激引起的RhoA/ROCK通路活化的影響
    4 小結(jié)
    5 討論
結(jié)論
展望
參考文獻
文獻綜述
    信號通路與高血壓研究及中醫(yī)藥治療進展
        參考文獻
    蓮子心及其生物堿保護心血管的研究進展
        參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3933766