目的探討連翹苷(PHN)對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的抑制作用及機(jī)制。方法建立體外LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)炎癥模型研究炎性細(xì)胞因子的分泌及相關(guān)通路蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)不同濃度的PHN對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活性的影響,采用Griess法檢測(cè)細(xì)胞上清液中一氧化氮(NO)釋放量,ELISA法檢測(cè)白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)量,Western blot法檢測(cè)TLR4信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá),分子對(duì)接驗(yàn)證結(jié)合模式。并且建立體內(nèi)LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷(ALI)模型,通過觀察組織病理學(xué)變化,研究PHN的保護(hù)作用。結(jié)果 PHN在30μmol/L以下濃度范圍對(duì)細(xì)胞增殖無明顯抑制作用。并且PHN對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞細(xì)胞分泌NO、TNF-α和IL-6具有抑制作用。進(jìn)一步的研究表明,PHN通過抑制TLR4信號(hào)通路抑制巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌,并且分子對(duì)接顯示PHN與TLR4蛋白直接有較好的親和力。另外,PHN在LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷模型中顯示出良好的體內(nèi)抗炎活性。結(jié)論 PHN可以有效地調(diào)控LPS誘導(dǎo)的炎癥,其機(jī)制可能是阻斷TLR4信號(hào)通...

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圖1PHN對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NO釋放的抑制率

用LPS處理RAW264.7細(xì)胞導(dǎo)致炎癥因子的分泌,包括NO、IL-6和TNF-α。與空白對(duì)照組相比,LPS模型組細(xì)胞上清液的NO含量明顯增加。PHN作用的細(xì)胞上清液中NO含量明顯低于LPS模型組。其中,當(dāng)濃度為10μmol/L時(shí),PHN對(duì)NO釋放的抑制率為63.34%;當(dāng)濃....

圖2PHN對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

為了避免對(duì)NO釋放的抑制作用與細(xì)胞活力相關(guān),采用MTT測(cè)定法檢測(cè)不同濃度PHN及塞來昔布對(duì)細(xì)胞活力的影響。如圖2,PHN和陽(yáng)性藥物在不同濃度范圍內(nèi)(10、20、30μmol/L)對(duì)細(xì)胞增殖無明顯抑制作用,細(xì)胞存活率均大于95%,不同劑量的PHN組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明PH....

圖3PHN對(duì)RAW264.7細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子分泌量的變化

通過肺組織切片病理形態(tài)學(xué)變化評(píng)估PHN對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠模型的保護(hù)作用。如圖6所示,在正常小鼠中,肺泡結(jié)構(gòu)清晰、完整,肺泡腔內(nèi)無分泌物和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。LPS刺激導(dǎo)致顯著的炎癥改變,用PHN預(yù)處理LPS誘導(dǎo)的肺損傷炎癥小鼠,則明顯地改善了肺組織病變,肺泡腔炎性細(xì)胞減少,肺小葉....

圖4PHN對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)水平的影響

圖3PHN對(duì)RAW264.7細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子分泌量的變化圖5PHN插入TLR4活性位點(diǎn)的結(jié)合模式圖

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