目的:體外研究蒲公英萜醇(Taraxerol)對乳腺癌MCF-7細胞的抑制作用,并探討可能的分子機制。方法:采用噻唑藍實驗檢測蒲公英萜醇對乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231增殖能力的影響,篩選出對藥物敏感的細胞以及合適的濃度和時間進行后續(xù)實驗;應用平板克隆實驗檢測蒲公英萜醇對細胞的集落形成能力影響；采用DCFH-DA熒光染色法觀察細胞內(nèi)活性氧生成量變化;利用Hoechst熒光染色檢測在蒲公英萜醇的作用下,乳腺癌細胞凋亡的形態(tài)學變化；通過流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率;應用吖啶橙染色、透射電鏡、免疫熒光染色觀察蒲公英萜醇處理后細胞發(fā)生自噬的情況;利用Western blot實驗檢測蒲公英萜醇用藥后細胞凋亡和自噬相關(guān)蛋白表達以及相關(guān)信號通路的變化情況。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示蒲公英萜醇對MDA-MB-231細胞沒有明顯影響,MCF-7細胞的增殖能力受到顯著抑制且呈濃度依賴性;顯微鏡下觀察用藥后MCF-7細胞數(shù)量減少;平板克隆實驗結(jié)果顯示蒲公英萜醇可顯著抑制MCF-7細胞克隆形成能力;DCFH-DA染色結(jié)果顯示,用藥組細胞內(nèi)ROS水平升高;Hoechst實驗結(jié)果表明,蒲公英萜醇用藥組細胞出現(xiàn)凋...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．不同途徑的凋亡通路示意圖??（摘自?Ｔｈｅ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：?ｔｈｅｒｅ?ｉｓ?ｍｏｒｅ?ｔｏ?ｌｉｆｅ?ｔｈａｎ?Ｂｄ２．０ｎｃｏｇｅｎｅ．２００３?Ｎｏｖ?２４；?２２??（５３）：８５６８－８０．）??

圖１．不同途徑的凋亡通路示意圖???ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：?ｔｈｅｒｅ?ｉｓ?ｍｏｒｅ?ｔｏ?ｌｉｆｅ?ｔｈａｎ?Ｂｄ２．０ｎｃｏｇｅｎｅ．２００３（５３）：８５６８－８０．）??現(xiàn)代生命科學在細胞凋亡研究后的又一較熱門的研宄領域。學家Ｃ．ｄｅ?Ｄｕｖｅ....

圖２．哺乳動物細胞內(nèi)３種主要自噬形式??（摘自?Ａｕｔｏｐｈａｇｙ?ａｎｄ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ：?Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ?ＭＨＣ?ｃｌａｓｓ?ｌｌ?ａｎｔｉｇｅｎ?ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ??ｓｔｒｅｓｓ．Ｐｒｏｃ?Ｎａｔｌ?Ａｃａｄ?Ｓｃｉ?Ｕ?Ｓ?Ａ．２００５?Ｍａｙ?３１?；ｌ０２（２２）：７７７９－８０．）??

延邊大學碩士學位論自嗤（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄＡｕｔｏｐｈａｇｙ，ＣＭＡ）?［２義巨自嗤是指非溶酶體來源的膜結(jié)構(gòu)的自噬泡，將細胞質(zhì)中的可溶性蛋白和變性受損的細胞器進行包裹，自與溶酶體發(fā)生融合，進而將待降解的物質(zhì)底物運輸至溶酶體進行降解加工。其負責降解細胞中穩(wěn)定存在的....

圖３．?ＭＴＴ法檢測蒲公英萜醇對乳腺癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１和ＭＣＦ－７增殖的影響??

（１２．５、２５、５０、１００和?２００＾ｌｍｏｌ／Ｌ）分別處理乳腺癌細胞ＭＣＦ－７和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??一定時間后（２４，?４８和７２ｈ），結(jié)果顯示，給藥４８ｈ后，蒲公英萜醇對ＭＣＦ－７細胞??顯示出明顯的抑制作用，且呈劑量依賴性（圖３）。當蒲公英萜醇濃度為１００?ｐｍｏｌ....

圖４．顯微鏡觀察蒲公英？ｇ醇對ＭＣＦ－７細胞形態(tài)變化的影響（２００Ｘ）??

Ｃｏｎｔｒｏｌ組細胞成團生長，連接緊密，形態(tài)飽滿。用藥組細胞的數(shù)量減少，且??形態(tài)發(fā)生了一定變化：細胞連接逐漸分散，形態(tài)不規(guī)則，貼壁能力降低。提示蒲公??英萜醇處理細胞后對ＭＣＦ－７細胞造成了一定損傷（圖４）。??Ｔａｒａｘｅｒｏｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?５０｜ｊＩＶＩ?１００｜ｊＭ....

本文編號：3900440