目的:包蟲病的治療目前以苯并咪唑類藥物為主,阿苯達(dá)唑是國際公認(rèn)最有效的抗包蟲藥物,但由于阿苯達(dá)唑治療周期長(6個(gè)月以上),對人體產(chǎn)生明顯的毒副作用。因此尋找新的有效抗包蟲藥物是目前亟待解決的問題。本實(shí)驗(yàn)研究基于計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)通過目前臨床推薦使用的有效抗包蟲藥物與包蟲β-tubulin結(jié)合能,驗(yàn)證抗包蟲藥物與包蟲β-tubulin結(jié)合能的大小與對包蟲的治療效果是否正相關(guān),進(jìn)一步驗(yàn)證計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)在抗包蟲藥物篩選上應(yīng)用的可行性,進(jìn)而利用計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)篩選抗包蟲的中藥單體。隨后通過體外實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證所篩選出的中藥單體實(shí)際抗包蟲效果,并從細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)方面進(jìn)一步篩選未來可能進(jìn)入臨床應(yīng)用的藥物。方法:利用Schrodinger 9.3.5軟件對細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin計(jì)算機(jī)同源建模,用Schrodinger 9.3.5軟件分子對接驗(yàn)證苯并咪唑類藥物,用AutoDock軟件分子對接篩選中藥單體的篩選。通過已篩選苯并咪唑類藥物和中藥單體處理體外培養(yǎng)細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴,觀察原頭節(jié)形態(tài)學(xué)變化及計(jì)算死亡率。堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測藥物處理原頭節(jié)培養(yǎng)液堿性磷酸酶活性,Western ...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 包蟲病
        1.1.1 囊型包蟲病
        1.1.2 泡型包蟲病
    1.2 包蟲病的治療
        1.2.1 外科手術(shù)治療
        1.2.2 西藥治療
        1.2.3 中藥治療
        1.2.4 中西藥聯(lián)合治療
    1.3 計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)
        1.3.1 分子對接技術(shù)
        1.3.2 分子對接技術(shù)原理
        1.3.3 計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)在中藥篩選中的應(yīng)用
    1.4 微管蛋白
        1.4.1 微管蛋白的結(jié)構(gòu)和作用
        1.4.2 藥物的靶蛋白——微管蛋白
        1.4.3 抗寄生蟲藥苯并咪唑類藥物與微管蛋白
    1.5 研究目的與意義
第二章 計(jì)算機(jī)模擬分子對接技術(shù)對抗包蟲藥物的篩選
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin計(jì)算機(jī)同源建模
        2.2.2 并苯咪唑類藥物與細(xì)粒棘球絳蟲β-Tublin蛋白分子對接的驗(yàn)證..
        2.2.3 中藥單體與細(xì)粒棘球絳蟲β-Tublin蛋白分子對接的篩選
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin三維結(jié)構(gòu)模型
        2.3.2 計(jì)算機(jī)模擬驗(yàn)證苯并咪唑類藥物與細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin分子對接
        2.3.3 計(jì)算機(jī)模擬對接示意圖
        2.3.4 計(jì)算機(jī)模擬篩選中藥單體庫與細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin分子對接.
    2.4 討論
        2.4.1 細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin計(jì)算機(jī)同源建模
        2.4.2 苯并咪唑藥物與細(xì)粒棘球絳蟲β-tubulin模型分子對接的驗(yàn)證
        2.4.3 通過分子對接技術(shù)篩選與β-tubulin結(jié)合的中藥單體
第三章 分子對接驗(yàn)證苯并咪唑類藥物與篩選中藥單體體外抗原頭蚴的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴
        3.1.2 阿苯達(dá)唑亞砜對映體拆分試劑
        3.1.3 藥物配置
        3.1.4 主要試劑
        3.1.5 主要儀器及設(shè)備
        3.1.6 主要試劑的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 阿苯達(dá)唑亞砜對映體拆分
        3.2.2 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體外培養(yǎng)
        3.2.3 堿性磷酸酶的檢測
        3.2.4 Westernbloting檢測原頭節(jié)β-TublinmRNA的表達(dá)
        3.2.5 qPCR檢測原頭節(jié)β-TublinmRNA的含量
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理及實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 阿苯達(dá)唑亞砜拆分
        3.3.2 苯并咪唑類藥物體外抗包蟲的觀察
        3.3.3 苯并咪唑類藥物對原頭節(jié)的抑制率
        3.3.4 并苯咪唑類藥物對堿性磷酸酶的影響
        3.3.5 并苯咪唑類藥物對原頭節(jié)β-Tublin蛋白表達(dá)的影響
        3.3.6 并苯咪唑類藥物對包蟲β-TublinmRNA表達(dá)的影響
        3.3.7 中藥單體體外抗包蟲的觀察
        3.3.8 中藥單體對原頭節(jié)的抑制率
        3.3.9 中藥單體對堿性磷酸酶的影響
        3.3.10 中藥單體對包蟲β-Tublin蛋白表達(dá)的影響
        3.3.11 中藥單體對包蟲β-TublinmRNA表達(dá)的影響
    3.4 討論
        3.4.1 體外藥物處理原頭節(jié)的實(shí)驗(yàn)研究
        3.4.2 分子對接技術(shù)驗(yàn)證苯并咪唑類藥物體外抗包蟲的實(shí)驗(yàn)研究
        3.4.3 分子對接技術(shù)篩選中藥單體體外抗包蟲的實(shí)驗(yàn)研究
第四章 阿苯達(dá)唑亞砜與中藥單體的細(xì)胞毒性研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 HepG2細(xì)胞
        4.1.2 藥物配置
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器及設(shè)備
        4.1.5 主要試劑的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        4.2.3 HepG2細(xì)胞增殖的檢測
        4.2.4 HepG2細(xì)胞周期影響的檢測
        4.2.5 HepG2細(xì)胞早期凋亡的檢測
        4.2.6 Westernblot檢測HepG2細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白
        4.2.7 qPCR檢測HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA的含量
        4.2.8 細(xì)胞免疫熒光檢測HepG2細(xì)胞的微管形成
        4.2.10 數(shù)據(jù)處理及實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2細(xì)胞增殖的影響
        4.3.2 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2形態(tài)及細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.3 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2細(xì)胞周期的影響
        4.3.4 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.5 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.3.6 阿苯達(dá)唑亞砜及對映體對HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA表達(dá)的影響
        4.3.7 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體對HepG2細(xì)胞微管的影響
        4.3.8 中藥單體PFM和NIP對HepG2細(xì)胞增殖的影響
        4.3.9 中藥單體PFM和NIP對HepG2細(xì)胞凋亡及其形態(tài)的影響
        4.3.10 中藥單體PFM與NIP對HepG2細(xì)胞周期的影響
        4.3.11 中藥單體PFM與NIP對HepG2細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.12 中藥單體PFM與NIP對HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響
        4.3.13 中藥單體PFM和NIP對HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA的影響
        4.3.14 中藥單體PFM與NIP對HepG2細(xì)胞微管的影響
    4.4 討論
        4.4.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        4.4.2 阿苯達(dá)唑亞砜及其對映體細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        4.4.3 中藥單體PFM、NIP細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
第五章 結(jié)論
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 研究展望
參考文獻(xiàn)
在校期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3875229