目的:作為茄科酸漿屬植物的主要活性物質(zhì),酸漿苦素B具有非常廣譜的生物活性,例如:抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤。然而其在非小細胞肺癌中的作用和機制尚未明確闡明。我們前期研究發(fā)現(xiàn),肺部組織可能是酸漿苦素B作用的靶向器官,同時其對A549細胞具有很好細胞毒作用。為了深入探究上述問題,本課題以人的非小細胞肺癌A549細胞作為研究對象,觀察酸漿苦素B對該細胞的增殖抑制、周期調(diào)控及凋亡誘導等方面的作用,并對相關(guān)作用機制進行探究,進而為藥物的開發(fā)提供新的思路。方法:(1)結(jié)合實時無標記細胞分析技術(shù)和統(tǒng)計學方法分析酸漿苦素B對A549細胞的增殖抑制作用;(2)運用流式細胞術(shù)觀察酸漿苦素B對A549細胞周期、凋亡率的干預(yù)作用;(3)運用western bolt和real-time PCR技術(shù)檢測酸漿苦素B作用下p53、p21、CDC2和Cyclin B1蛋白及mRNA表達水平的變化,揭示其影響細胞周期及誘導凋亡的相關(guān)機制;(4)運用免疫熒光技術(shù)分析酸漿苦素B對胞內(nèi)線粒體形態(tài)的影響;(5)運用海馬能量代謝分析系統(tǒng)分析酸漿苦素B對線粒體呼吸鏈功能影響;(6)運用流式細胞術(shù)分析酸漿苦素B作用下,線粒體膜電勢和活性氧...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
1 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 細胞凋亡
        1.2.1 細胞凋亡概念
        1.2.2 線粒體與細胞凋亡
    1.3 細胞周期
        1.3.1 細胞周期概念
        1.3.2 線粒體與細胞周期
    1.4 酸漿苦素B的研究進展
    1.5 本課題的研究思路
2 材料與方法
    2.1 實驗細胞株
    2.2 實驗藥物
    2.3 實驗試劑
        2.3.1 化學試劑
        2.3.2 抗體
        2.3.3 試劑盒
    2.4 實驗儀器
    2.5 實驗方法
        2.5.1 PB藥物的配制法
        2.5.2 培養(yǎng)基的配制
        2.5.3 細胞培養(yǎng)與傳代
        2.5.4 細胞計數(shù)(血球板計數(shù)法)
        2.5.5 實時無標記細胞分析術(shù)檢測細胞增殖
        2.5.6 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測早期細胞凋亡
        2.5.7 細胞周期檢測
        2.5.8 線粒體膜電勢(MMP)檢測
        2.5.9 線粒體內(nèi)活性氧(ROS)檢測
        2.5.10 BCA法測定蛋白濃度
        2.5.11 蛋白免疫印跡
        2.5.12 real-time PCR
        2.5.13 氧耗速率測定
        2.5.14 分光光度法檢測caspase活性
        2.5.15 ATP檢測
        2.5.16 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 PB抑制A549細胞增殖
    3.2 PB誘導A549細胞發(fā)生G₂/M細胞周期阻滯
    3.3 PB導致線粒體形態(tài)變化
    3.4 PB下調(diào)線粒體呼吸鏈復合物表達
    3.5 PB導致線粒體呼吸功能損傷
    3.6 PB降低A549細胞ATP產(chǎn)量
    3.7 PB誘導A549細胞線粒體膜電勢下降
    3.8 PB誘導A549細胞氧化應(yīng)激
    3.9 PB誘導A549細胞凋亡
4 討論
5 結(jié)論
6 展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：3858211