樺木酸是一種天然的五環(huán)三萜類化合物,可抑制多種腫瘤細胞系的增殖,且抑制機制具有細胞特異性,在不同細胞中的抑制靶點不盡相同。以往研究發(fā)現(xiàn)樺木酸可抑制宮頸癌細胞系生長,但抑制機理并不清楚,因此本論文以人宮頸癌細胞系HeLa為研究對象,解析樺木酸抑制細胞增殖和促進凋亡作用及其介導的信號轉(zhuǎn)導通路,為深入闡明樺木酸抑制人宮頸癌細胞的增殖機制提供實驗依據(jù)。1.不同濃度樺木酸處理HeLa細胞不同時間的結(jié)果證實樺木酸可有效抑制HeLa細胞增殖并引起細胞凋亡,且呈現(xiàn)時間和劑量依賴性。計算不同處理時間點下的半數(shù)抑制濃度(IC50),并結(jié)合細胞凋亡檢測結(jié)果,為保證蛋白總量能夠滿足雙向電泳要求,確定以30 μmol/L樺木酸處理HeLa細胞系48 h為雙向電泳實驗的處理條件。2.蛋白質(zhì)組學分析顯示,HeLa細胞中有36個蛋白質(zhì)受樺木酸誘導差異表達,其中有6個上調(diào)蛋白質(zhì),30個下調(diào)蛋白質(zhì)。功能學分析表明這些蛋白分別參與了細胞代謝、生化反應、蛋白定位等不同的生物學過程,而依據(jù)蛋白質(zhì)的功能不同,又可將其分成催化功能型蛋白、氧化還原型蛋白、翻譯調(diào)控型蛋白等。遺憾的是,依據(jù)蛋白質(zhì)組學分析結(jié)果未能推測出與細胞增殖和凋亡直...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 樺木酸及其抗腫瘤活性
        1.1.1 樺木酸結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)
        1.1.2 樺木酸抗腫瘤活性
        1.1.3 樺木酸誘導細胞凋亡機制
    1.2 細胞增殖機制與腫瘤發(fā)展
        1.2.1 細胞增殖
        1.2.2 宮頸癌
    1.3 蛋白質(zhì)組學概述
        1.3.1 蛋白質(zhì)組學在不同疾病研究中的應用
        1.3.2 蛋白質(zhì)組學在藥物研發(fā)中的應用
    1.4 立題依據(jù)
2 樺木酸抑制HeLa細胞系增殖的蛋白質(zhì)組學分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗試劑
        2.1.3 常用試劑配方
        2.1.4 試驗儀器
        2.1.5 試驗方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 樺木酸對HeLa細胞增殖和凋亡的影響
        2.2.2 樺木酸誘導的HeLa細胞蛋白質(zhì)差異表達
        2.2.3 差異蛋白質(zhì)定位及功能分類
        2.2.4 qRT-PCR驗證
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
3 樺木酸抑制HeLa細胞系增殖的信號途徑分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗試劑
        3.1.3 常用試劑配方
        3.1.4 試驗儀器
        3.1.5 試驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 樺木酸抑制HeLa細胞增殖和誘導凋亡的時間節(jié)點
        3.2.2 樺木酸對PI3K/Akt信號途徑的影響
        3.2.3 樺木酸促進p21^Waf1/Cip1和p27^Kip蛋白表達并導致細胞周期停滯
        3.2.4 樺木酸促進線粒體依賴的凋亡途徑
        3.2.5 樺木酸可誘發(fā)HeLa細胞內(nèi)的ROS產(chǎn)生
        3.2.6 抗氧化物維持PI3K/Akt的磷酸化活性并阻斷細胞凋亡
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 結(jié)論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝
附件



本文編號：3850468