紅松籽油是從紅松種籽中提取的一種天然油脂,其中含有豐富的亞油酸,油酸和皮諾斂酸等不飽和脂肪酸,其生物活性極其豐富,其中的皮諾斂酸是松籽油中特有的18個碳的不飽和脂肪酸。本文首次研究了皮諾斂酸抑制油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞中脂質(zhì)積累及其初步分子機(jī)制。此外左旋肉堿是從紅色肉類中提取出的一種類維生素,對減肥及脂肪的消耗有顯著的作用。為達(dá)到最佳的降脂效果,本論文研究了皮諾斂酸/左旋肉堿復(fù)配物的最佳降脂濃度配比。本文主要研究成果如下:1.皮諾斂酸具有抑制HepG2細(xì)胞脂質(zhì)累積作用。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明0.5 mM油酸對HepG2及L02細(xì)胞的生存率沒有顯著的抑制作用,油紅O染色結(jié)果表明,0.5 mM油酸處理HepG2細(xì)胞24h時,細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的脂滴。因此,采用0.5mM油酸培養(yǎng)HepG2細(xì)胞24 h,成功誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞成脂。MTT實(shí)驗(yàn)表明皮諾斂酸處理HepG2及L02細(xì)胞12h時,其細(xì)胞生存率較高,40μM濃度以下的皮諾斂酸對HepG2及L02細(xì)胞均無顯著的抑制作用。皮諾斂酸(10、15、20、25 μM)預(yù)處理12 h后,HepG2細(xì)胞內(nèi)脂滴量、甘油三酯和總膽固醇含量顯著降低(與模型組相比),...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 松籽的研究概況
        1.1.1 松籽簡介
        1.1.2 松籽油的有效成分
        1.1.3 松籽油主要的藥理活性
    1.2 皮諾斂酸的藥理活性
    1.3 肥胖
        1.3.1 肥胖的概述
        1.3.2 肥胖產(chǎn)生的原因
        1.3.3 肥胖相關(guān)疾病的危害
        1.3.4 預(yù)防及治療肥胖的措施
        1.3.5 天然產(chǎn)物對于減肥降脂的研究
    1.4 研究的目的和意義
2 皮諾斂酸對HepG2細(xì)胞脂質(zhì)積累的抑制作用
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        2.2.1 細(xì)胞株
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.4 主要溶液配制
        2.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)用品的準(zhǔn)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
        2.3.3 MTT法檢測HepG2和L02細(xì)胞的存活率
        2.3.4 篩選油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂滴積累的最適濃度
        2.3.5 檢測皮諾斂酸處理后細(xì)胞內(nèi)脂滴的含量
        2.3.6 檢測細(xì)胞內(nèi)總膽固醇及甘油三酯的水平
        2.3.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 皮諾斂酸對HepG2及L02細(xì)胞增殖的影響
        2.4.2 油酸對HepG2及L02細(xì)胞增殖的影響
        2.4.3 油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂滴積累條件的確定
        2.4.4 皮諾斂酸對HepG2細(xì)胞中脂滴積累的影響
        2.4.5 皮諾斂酸對細(xì)胞中總膽固醇及甘油三酯水平的影響
    2.5 本章小結(jié)
3 皮諾斂酸降低油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)積累的分子機(jī)制
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        3.3.1 細(xì)胞內(nèi)抗氧化因子含量的檢測
        3.3.2 細(xì)胞內(nèi)MDA含量的檢測
        3.3.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平
        3.3.4 Wester blot檢測細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激及脂質(zhì)相關(guān)蛋白
        3.3.5 Wester blot檢測AMPK通路相關(guān)蛋白
        3.3.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 皮諾斂酸預(yù)處理對細(xì)胞抗氧化因子含量的影響
        3.4.2 皮諾斂酸預(yù)處理對細(xì)胞MDA含量的影響
        3.4.3 皮諾斂酸預(yù)處理對細(xì)胞活性氧水平的影響
        3.4.4 皮諾斂酸預(yù)處理對細(xì)胞Nrf2和HO-1蛋白的影響
        3.4.5 皮諾斂酸預(yù)處理對細(xì)胞成脂蛋白的影響
        3.4.6 皮諾斂酸通過激活A(yù)MPK/SIRT1通路抑制細(xì)胞脂質(zhì)的積累
    3.5 本章小結(jié)
4 皮諾斂酸/左旋肉堿復(fù)配物降脂活性評估
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        4.2.1 細(xì)胞株
        4.2.2 主要儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.4 主要溶液配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        4.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        4.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
        4.3.3 MTT法檢測HepG2細(xì)胞活性
        4.3.4 油紅O染色法檢測細(xì)胞內(nèi)脂滴含量
        4.3.5 優(yōu)化皮諾斂酸/左旋肉復(fù)配物的最佳降脂濃度
        4.3.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 皮諾斂酸及左旋肉堿對細(xì)胞活力的影響
        4.4.2 皮諾斂酸及左旋肉對細(xì)胞內(nèi)脂滴積累的影響
        4.4.3 皮諾斂酸/左旋肉堿復(fù)配物最佳降脂濃度的確定
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3837723