炎癥是機(jī)體或組織受到有害刺激(如受損細(xì)胞、刺激物或病原體)時(shí)產(chǎn)生的一種應(yīng)激生理反應(yīng),盡管炎癥是機(jī)體的防御機(jī)制,但過(guò)度也會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定損害。糖皮質(zhì)激素類(lèi)抗炎藥和非甾體抗炎藥是常用的抗炎藥,雖然兩者在臨床上都有較好的抗炎效果,但長(zhǎng)期大劑量使用也會(huì)對(duì)機(jī)體造成許多不良反應(yīng)。因此,建立一個(gè)抗炎藥物篩選平臺(tái),從化合物或中草藥中尋找低毒高效的新型抗炎藥物,具有重要科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。本研究構(gòu)建工程化酵母,利用人微血管內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1模型,建立一個(gè)基于細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)信號(hào)通路的抗炎藥物篩選平臺(tái),從化合物庫(kù)篩選出具有抗炎活性化合物;同時(shí)制備一個(gè)中草藥組分庫(kù),從中篩選具有抗炎活性的組分,并通過(guò)活性追蹤分離出抗炎活性化合物。主要結(jié)果如下:1.在酵母表面雙雜交的基礎(chǔ)上,建立了雙通道蛋白表達(dá)系統(tǒng)的工程酵母:將淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1(LFA-1)αL I domain表達(dá)于酵母表面用于和ICAM-1結(jié)合,在胞內(nèi)表達(dá)綠色熒光蛋白GFP用于熒光指示。驗(yàn)證了脂多糖(LPS)誘導(dǎo)HMEC-1細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng),同時(shí)ICAM-1顯著上調(diào);在顯微鏡下觀察到HMEC-1細(xì)胞與工程化酵母特異結(jié)合,并通過(guò)酶標(biāo)儀...

【文章頁(yè)數(shù)】：183 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略表
第一章 研究背景
    1 炎癥
        1.1 炎癥概述
        1.2 炎癥的發(fā)展途徑
        1.3 炎癥與慢性疾病
    2 抗炎藥物研究進(jìn)展
        2.1 糖皮質(zhì)激素抗炎藥
        2.2 非甾體類(lèi)抗炎藥(NSAIDs)
            2.2.1 非甾體類(lèi)抗炎藥(NSAIDs)概述
            2.2.2 NSAIDs的歷史發(fā)展
            2.2.3 NSAIDs的發(fā)現(xiàn)
            2.2.4 NSAIDs的類(lèi)別
            2.2.5 NSAIDs的作用機(jī)制
            2.2.6 NSAIDs的不良反應(yīng)
        2.3 天然產(chǎn)物和中藥抗炎活性研究
        2.4 本研究目的與意義
第二章 基于ICAM-1 信號(hào)通路抗炎藥物篩選模型的建立
    1 引言
        2.材料與方法
        2.1 試劑與儀器
            2.1.1 試驗(yàn)試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要溶液的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 抗炎藥物篩選模型設(shè)計(jì)
            2.2.2 新型工程酵母載體的設(shè)計(jì)
            2.2.3 抗炎藥物篩選工程化酵母的構(gòu)建
            2.2.4 HMEC-1 細(xì)胞炎癥模型的構(gòu)建和驗(yàn)證
            2.2.5 抗炎藥物篩選模型的構(gòu)建和驗(yàn)證
            2.2.6 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 抗炎藥物篩選工程化酵母的的驗(yàn)證
        3.2 HMEC-1 細(xì)胞炎癥模型的驗(yàn)證
        3.3 抗炎藥物篩選模型的驗(yàn)證
    4 討論
第三章 利用抗炎藥物篩選模型篩選化合物庫(kù)和中草藥組分中抗炎活性成分
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 試劑和儀器
            2.1.1 試驗(yàn)試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 中草藥組分庫(kù)的制備
            2.2.2 對(duì)化合物庫(kù)和中草藥組分庫(kù)的抗炎活性篩選
            2.2.3 MTT法測(cè)定細(xì)胞活力
            2.2.4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 化合物庫(kù)抗炎活性成分的篩選
            3.1.1 化合物庫(kù)抗炎活性成初步篩選
            3.1.2 化合物在細(xì)胞上的活性研究
            3.1.3 化合物在小鼠體內(nèi)的活性研究
        3.2 中草藥組分庫(kù)抗炎活性成分的篩選
            3.2.1 中草藥組分庫(kù)抗炎活性成分初步篩選
            3.2.2 候選組分在小鼠上抗炎活性驗(yàn)證
    4 討論
第四章 白英抗炎活性的化學(xué)成分研究
    1 引言
        1.1 白英化學(xué)成分研究
        1.2 白英藥理作用研究
            1.2.1 抗癌作用
            1.2.2 抗炎作用
            1.2.3 抗過(guò)敏作用
    2 抗炎活性單體化合物的追蹤分離
        2.1 有效部位的獲得
        2.2 正丁醇萃取物中活性成分的分離純化
        2.3 乙酸乙酯萃取中活性成分的分離純化
    3 化合物鑒定
    4 活性部位洗脫各部分和單體化合物的抗炎活性研究
        4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2 儀器
        4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.4.1 白英活性部位洗脫各部分的抗炎活性
            4.4.2 單體化合物的抗炎活性
    5 實(shí)驗(yàn)部分
        5.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        5.2 藥材
        5.3 化學(xué)成分的具體分離
        5.4 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定光譜數(shù)據(jù)
    6 討論
第五章 全文總結(jié)和展望
    1 結(jié)論
    2 研究創(chuàng)新點(diǎn)
    3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 Ⅰ:論文中補(bǔ)充表格
    附錄 Ⅱ:化合物的NMR圖譜
    附錄 Ⅲ:作者簡(jiǎn)歷及攻讀博士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3815121