何首烏為我國傳統(tǒng)中藥,近年來有關(guān)其肝毒性報(bào)道日益增多,為減少藥物毒副作用,確保臨床用藥安全,本論文以何首烏為研究對象,通過免疫應(yīng)激模型從體內(nèi)體外試驗(yàn)探究其主要毒性物質(zhì)基礎(chǔ)、建立各部位指紋圖譜明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)要求。主要研究內(nèi)容如下:1.何首烏肝毒性部位的篩選目的:明確何首烏肝毒性主要部位方法:通過LPS建立細(xì)胞免疫應(yīng)激模型,MTT檢測不同部位藥材(生品、炮制品、水洗部位、50%乙醇部位、95%乙醇部位)對L-02細(xì)胞(正常人肝細(xì)胞)的抑制率、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡、ELISA試劑盒檢測培養(yǎng)液上清中ALT、AST含量;采用LPS建立免疫應(yīng)激大鼠動物模型,試驗(yàn)分為18組,以灌胃的方式給予不同劑量藥物,觀察肝臟指數(shù)、血清中ALT、AST、LDH釋放率、肝臟病理學(xué)改變。結(jié)果:在此模型下,體外試驗(yàn)表明當(dāng)濃度為400μg·mL-1時(shí),50%乙醇部位細(xì)胞抑制率、凋亡率、細(xì)胞上清液ALT、AST含量都最高;體內(nèi)動物試驗(yàn)中50%乙醇部位能顯著增加大鼠肝臟指數(shù)、提高血清中ALT、AST、LDH釋放率、肝臟有病理學(xué)改變。結(jié)論:結(jié)合體內(nèi)體外試驗(yàn),在免疫應(yīng)激模型下,誘導(dǎo)何首烏肝毒性的部位為50%乙醇部位。2.何首...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 何首烏肝毒性部位篩選研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 試驗(yàn)動物
        1.3 材料
        1.4 試劑與藥品
        1.5 主要儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 何首烏不同提取部位藥材的制備
        2.2 何首烏不同提取部位藥材體外肝毒性篩選
            2.2.1 MTT 工作液配制
            2.2.2 人正常肝臟L-02細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.2.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            2.2.5 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞毒性的影響
            2.2.6 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞凋亡的影響
            2.2.7 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞AST、ALT釋放水平的影響
        2.3 何首烏不同提取部位藥材體內(nèi)肝毒性篩選
            2.3.1 動物分組與給藥
            2.3.2 不同提取部位藥材對大鼠肝臟指數(shù)的影響
            2.3.3 不同提取部位藥材對大鼠血清ALT、AST、LDH的影響
            2.3.4 肝臟病理學(xué)切片
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 細(xì)胞形態(tài)觀察
        3.2 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞毒性的影響
        3.3 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L02細(xì)胞凋亡的影響
        3.4 不同提取部位藥材對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞AST、ALT釋放水平的影響
        3.5 不同提取部位藥材對大鼠肝臟指數(shù)的影響
        3.6 不同提取部位藥材對大鼠血清ALT、AST、LDH的影響
        3.7 肝臟病理學(xué)切片
    4 討論
第二章 何首烏肝毒性物質(zhì)基礎(chǔ)的驗(yàn)證
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 試驗(yàn)動物
        1.3 材料
        1.4 試劑與藥品
        1.5 主要儀器
    2 方法
        2.1 二苯乙烯苷的富集
            2.1.1 提取
            2.1.2 分離
            2.1.3 晶體結(jié)構(gòu)解析
        2.2 TSG單體體外細(xì)胞毒性驗(yàn)證
            2.2.1 藥物配置
            2.2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            2.2.3 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞毒性的影響
            2.2.4 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞凋亡的影響
            2.2.5 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞AST、ALT釋放水平的影響
        2.3 TSG單體體內(nèi)肝毒性驗(yàn)證
            2.3.1 動物分組與給藥
            2.3.2 不同濃度TSG單體對大鼠肝臟指數(shù)的影響
            2.3.3 不同濃度TSG單體對大鼠血清ALT、AST、LDH的影響
            2.3.4 肝臟病理學(xué)切片
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 晶體驗(yàn)證
        3.2 細(xì)胞形態(tài)觀察
        3.3 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞毒性的影響
        3.4 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L02細(xì)胞凋亡的影響
        3.5 不同濃度TSG單體對LPS誘導(dǎo)L-02細(xì)胞AST、ALT釋放水平的影響
        3.6 不同濃度TSG單體對大鼠肝臟指數(shù)的影響
        3.7 不同濃度TSG單體對大鼠血清ALT、AST、LDH的影響
        3.8 肝臟病理學(xué)切片
    4 討論
第三章 何首烏質(zhì)量控制研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑與藥品
        1.2 主要儀器
        1.3 材料
    2 方法
        2.1 不同產(chǎn)地何首烏50%乙醇部位指紋圖譜研究
            2.1.1 樣品前處理
            2.1.2 色譜條件
            2.1.3 對照品溶液的制備
            2.1.4 供試品溶液的制備
            2.1.5 線性關(guān)系考察
            2.1.6 方法學(xué)考察
            2.1.7 TSG含量測定
            2.1.8 何首烏指紋圖譜相似度評價(jià)
        2.2 不同產(chǎn)地何首烏95%乙醇部位指紋圖譜研究
            2.2.1 樣品的前處理
            2.2.2 色譜條件
            2.2.3 對照品溶液的制備
            2.2.4 供試品溶液的制備
            2.2.5 線性關(guān)系考察
            2.2.6 方法學(xué)考察
            2.2.7 大黃素和大黃素甲醚含量測定
            2.2.8 何首烏指紋圖譜相似度評價(jià)
    3 結(jié)果
        3.1 不同產(chǎn)地何首烏50%乙醇部位指紋圖譜研究
            3.1.1 含量測定
            3.1.2 參照峰的選擇
            3.1.3 指紋圖譜的建立及共有峰的標(biāo)定
            3.1.4 相似度計(jì)算
            3.1.5 聚類分析
            3.1.6 主成分分析
        3.2 不同產(chǎn)地何首烏95%乙醇部位指紋圖譜研究
            3.2.1 含量測定
            3.2.2 參照峰的選擇
            3.2.3 指紋圖譜的建立及共有峰的標(biāo)定
            3.2.4 相似度計(jì)算
            3.2.5 聚類分析
            3.2.6 主成分分析
    4 討論
總結(jié)
工作展望與思考
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3809909