近年來骨質(zhì)疏松的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)逐年升高,已經(jīng)成為威脅人類健康的重要慢性疾病。骨質(zhì)疏松癥是因骨形成和骨吸收二者之間的活動失衡所引起的骨礦物質(zhì)沉積減少和骨微結(jié)構(gòu)破壞,最終導(dǎo)致骨脆性增高和骨折危險性增加的一種全身性骨病。破骨細胞是一種終末分化的多核巨細胞,其前體細胞來源于造血干細胞,在多種細胞因子及激素的誘導(dǎo)下,可以分化融合成成熟的破骨細胞。骨骼中破骨細胞數(shù)量及活性的異常與多種骨代謝性疾病有關(guān),如骨質(zhì)疏松癥,骨硬化癥及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。因此,抑制破骨細胞的形成及其活性,對于開發(fā)研制治療骨質(zhì)疏松癥的新藥物,具有重要意義。楊梅苷,系五羥基黃酮-3-鼠李糖苷,為一種多酚羥基黃酮苷類化合物,大量存在于楊梅的果實、樹皮、樹葉及其他多種天然植物中。具有改善微循環(huán)、抗炎、抗氧化、抑制細胞凋亡等多種藥理活性。本課題建立了RAW264.7細胞培養(yǎng)體系、確定了誘導(dǎo)RAW264.7細胞分化為成熟破骨細胞的最佳條件,通過CCK-8細胞毒性實驗、TRAP染色實驗、RT-PCR實驗明確了楊梅苷對破骨細胞分化成熟的抑制作用。目的:建立RAW264.7細胞系,并誘導(dǎo)出分化成熟的破骨細胞。明確楊梅苷對RAW264.7細胞向...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
    1 骨質(zhì)疏松癥
    2 破骨細胞
        2.1 破骨細胞對骨質(zhì)疏松發(fā)病的作用
        2.2 骨代謝信號通路OPG/RANKL/RANK
        2.3 RAW264.7 細胞
    3 治療骨質(zhì)疏松的藥物
        3.1 目前骨質(zhì)疏松癥治療藥物及其副作用
        3.2 傳統(tǒng)中藥楊梅苷
第一部分 RAW264.7 細胞系的建立及破骨細胞的誘導(dǎo)
    1 材料與儀器
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)、傳代、凍存及復(fù)蘇
        2.2 破骨細胞誘導(dǎo)及TRAP染色
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 RAW264.7 細胞的正常形態(tài)
        3.2 RAW264.7 細胞的增殖曲線
        3.3 TRAP染色
        3.4 細胞接種密度對破骨細胞誘導(dǎo)的影響
        3.5 RANKL濃度對破骨細胞誘導(dǎo)的影響
    4 討論
        4.1 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)
        4.2 破骨細胞的誘導(dǎo)及TRAP染色
第二部分 楊梅苷對RAW264.7 細胞向破骨細胞分化的影響
    1 材料與儀器
        1.1 實驗試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 CCK-8 發(fā)測定楊梅苷對細胞活性的影響
        2.2 楊梅苷對成熟破骨細胞的影響
        2.3 楊梅苷對成熟破骨細胞相關(guān)基因表達的影響
        2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 CCK-8 法測定楊梅苷對細胞活性的影響
        3.2 楊梅苷對成熟破骨細胞的影響
        3.3 楊梅苷對破骨細胞相關(guān)基因表達的影響
    4 討論
        4.1 CCK-8 法測定楊梅苷對細胞的毒性作用
        4.2 楊梅苷對RAW264.7 細胞向成熟破骨細胞分化的抑制作用
第三部分 結(jié)語
    1 結(jié)論
    2 展望
參考文獻
附錄1:縮略詞表
文獻綜述
    參考文獻
致謝
在校期間主要研究成果



本文編號：3806559