目的:通過陽和湯大鼠含藥血清干預(yù)人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞,探究陽和湯對三陰性乳腺癌細胞增殖等的影響,揭示其對三陰性乳腺癌細胞增殖和細胞內(nèi)EZH2/NF-κB信號通路的作用機制。為陽和湯的體內(nèi)實驗和臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法:按照陽和湯的藥物組成及煎制方法,將藥物煎煮制成0.7g生藥量/mL的藥液。雌性SD大鼠合計30只,按照隨機數(shù)表法將其隨機分為5組,分別是空白對照組,陽和湯低、中、高劑量組,陽性藥物組,每組共計6只。空白對照組大鼠灌胃蒸餾水;陽和湯低、中、高劑量各組大鼠分別按為4.5g/kg、9g/kg、18g/kg(相當(dāng)于臨床用量5倍、10倍、20倍)的劑量灌胃給藥,同時,空白對照組和陽和湯低、中、高劑量組各組大鼠按15mg/kg的劑量尾靜脈注射5-FU配置液。陽性藥物組大鼠按15mg/kg(相當(dāng)于臨床人體用量)的劑量尾靜脈注射5-FU注射液,同時,灌胃蒸餾水。各組大鼠的灌胃體積按10mL/kg計算。連續(xù)不間斷給藥3d,采用腹主動脈取血的方法取血樣,取得的血樣進行離心,分離,除菌,滅活,即得所需含藥血清。實驗時,各組按10%含藥血清和90%L-15培養(yǎng)基(體積)均勻混...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語
中文摘要
英文摘要
前言
1.材料
    1.1 實驗細胞
    1.2 實驗動物
    1.3 主要藥物
    1.4 主要試劑
    1.5 主要儀器
    1.6 主要試劑的配制
2.方法
    2.1 技術(shù)路線圖
    2.2 藥物制備
        2.2.1 陽和湯的制備
        2.2.2 陽和湯含藥血清的制備
    2.3 細胞培養(yǎng)與傳代
        2.3.1 細胞的培養(yǎng)
        2.3.2 細胞的傳代
        2.3.3 細胞的計數(shù)
    2.4 細胞的凍存與復(fù)蘇
        2.4.1 細胞的復(fù)蘇
        2.4.2 細胞的凍存
    2.5 細胞增殖實驗
        2.5.1 實驗分組
        2.5.2 實驗步驟與給藥
    2.6 細胞周期實驗
    2.7 細胞凋亡實驗
    2.8 細胞外目的蛋白的檢測
        2.8.1 含藥血清干預(yù)細胞
        2.8.2 蛋白的提取
        2.8.3 ELISA法檢測蛋白
    2.9 細胞內(nèi)目的蛋白的檢測
        2.9.1 含藥血清干預(yù)細胞
        2.9.2 細胞總蛋白的提取
        2.9.3 細胞核蛋白的提取
        2.9.4 蛋白濃度的測定
        2.9.5 蛋白上樣液的處理
        2.9.6 WesternBlot檢測蛋白
    2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
3.結(jié)果
    3.1 陽和湯對MDA-MB-231細胞增殖的影響
    3.2 陽和湯對MDA-MB-231細胞周期分布的影響
    3.3 陽和湯對MDA-MB-231細胞凋亡的影響
    3.4 陽和湯對MDA-MB-231細胞TNF-α、IL-6、IL-8分泌的影響
    3.5 陽和湯對MDA-MB-231細胞TNF-α、IL-6、IL-8表達的影響
    3.6 陽和湯對MDA-MB-231細胞EZH2、NF-κB(p65)表達的影響
4.討論
    4.1 陽和湯抗腫瘤作用
    4.2 陽和湯抗腫瘤作用分析
    4.3 三陰性乳腺癌的研究進展
        4.3.1 EZH2、NF-κB的作用
        4.3.2 EZH2和NF-κB促進乳腺癌細胞自分泌炎癥細胞因子的機制
        4.3.3 IL-6和IL-8信號通路與腫瘤生長的關(guān)系
    4.4 實驗方法的討論
        4.4.1 含藥血清的制備
        4.4.2 陽性藥物的選擇
        4.4.3 細胞增殖實驗方法的選擇
        4.4.4 細胞核蛋白的檢測
    4.5 實驗結(jié)果的探討
        4.5.1 陽和湯對MDA-MB-231細胞增殖、凋亡和周期分布的影響
        4.5.2 陽和湯對MDA-MB-231細胞TNF-α、IL-6、IL-8胞外分泌及胞內(nèi)表達的影響
        4.5.3 陽和湯對MDA-MB-231細胞核內(nèi)EZH2、NF-κB(p65)的影響
    4.6 實驗結(jié)果的思考與展望
5.結(jié)論
參考文獻
綜述 陽和湯抗癌作用的研究進展
    1 陽虛則痰飲不化
    2 痰凝則氣血不行
    3 溫陽則正氣復(fù),解凝則痰飲化
    4 陽和湯抗腫瘤作用的研究
        4.1 陽和湯抗乳腺癌的研究
        4.2 陽和湯抗肺癌的研究
        4.3 陽和湯抗腫瘤骨轉(zhuǎn)移的研究
        4.4 陽和湯對腫瘤手術(shù)后的研究
        4.5 陽和湯聯(lián)合放、化療抗腫瘤的研究
        4.6 陽和湯抗其他腫瘤的研究
    5 結(jié)語
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及獲得獎項



本文編號：3771287