本實驗由“確立CCL₄綜合因素誘導大鼠肝纖維化模型”“雄芍湯防治肝纖維化作用與TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路”及“雄芍湯對大鼠肝細胞凋亡的影響”三部分組成。目的:本實驗從溫補脾腎的角度分析肝纖維化的防治,通過確立CCL₄綜合因素誘導大鼠肝纖維化模型進展期及恢復期,觀察雄芍湯防治肝纖維化的作用,揭示雄芍湯、肝纖維化、肝細胞及TRAIL-FADD/caspase8細胞凋亡通路之間的內(nèi)在聯(lián)系,探討雄芍湯防治肝纖維化的細胞凋亡通路,為中醫(yī)藥防治肝纖維化研究提供新的思路和方法。方法:實驗一30只健康雄性SD大鼠,皮下注射CCl₄與花生油的混合液（二者比例為4:6）,每周兩次,分別于周二、周五注射,注射劑量為3ml/kg/次（注:第1次皮下注射的CCl₄與花生油混合液比例為3:1,注射劑量為5ml/kg）,并給以玉米面+0.5%膽固醇+20%豬油的高脂低蛋白食物2周,玉米面+0.5%膽固醇的高脂低蛋白食物4周,飲料僅用30%酒精。分別于實驗的0、4、6、8周末,隨機選取6只收集血清及病理學標本,... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞
前言
    參考文獻
第一部分 確立CCL_4綜合因素誘導大鼠肝纖維化模型進展期與恢復期
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑及儀器
            1.2.1 大鼠造模試劑及儀器
            1.2.2 ALT、AST檢測試劑及儀器
            1.2.3 肝纖維化標志物檢測試劑及儀器
            1.2.4 HE及Masson染色試劑及儀器
            1.2.5 其他
    2 實驗方法
        2.1 實驗方案
        2.2 標本采集
            2.2.1 大鼠周圍血清標本收集
            2.2.2 大鼠肝臟組織標本收集
        2.3 指標檢測
            2.3.1 肝重指數(shù)計算
            2.3.2 血清ALT、AST檢測及方法
            2.3.3 血清HA、LN、PCⅢ,CIV檢測及方法
            2.3.4 肝組織羥脯氨酸(HyP)含量檢測及方法
            2.3.5 肝組織病理檢測及方法
        2.4 統(tǒng)計學處理
    3 實驗結果
        3.1 肝纖維化大鼠肝重指數(shù)的動態(tài)變化
        3.2 血清ALT、AST的動態(tài)變化
        3.3 血清HA、LN、PCⅢ及CIV的動態(tài)變化
        3.4 肝組織Hyp的動態(tài)變化
        3.5 肝組織病理學的動態(tài)變化
            3.5.1 肝組織HE染色動態(tài)變化
            3.5.2 肝組織Masson染色動態(tài)改變
    4 實驗討論
        4.1 四氯化碳綜合因素造模的探討
        4.2 肝重指數(shù)動態(tài)變化的探討
        4.3 血清ALT、AST變化的探討
        4.4 血清HA、LN、PCⅢ及CIV變化的探討
        4.5 肝組織Hyp動態(tài)變化的探討
        4.6 肝組織病理學檢測的動態(tài)變化的探討
        4.7 大鼠肝纖維化模型進展期和恢復期的確立
    參考文獻
第二部分 雄芍湯防治肝纖維化的作用與TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
    1 實驗材料
        1.1 動物
        1.2 雄芍湯
        1.3 主要試劑及儀器
            1.3.1 大鼠造模；ALT、AST檢測；HA、LN、PCⅢ,CIV檢測；Hyp檢測；HE染色；Masson染色檢測等所用主要試劑及儀器
            1.3.2 免疫組織化學染色試劑及儀器
            1.3.3 PCR檢測試劑及儀器
            1.3.4 Westernblot檢測試劑及儀器
    2 實驗方法
        2.1 大鼠分組與喂養(yǎng)
        2.2 標本收集與處理
        2.3 檢測內(nèi)容與方法
            2.3.1 各組大鼠肝重指數(shù)
            2.3.2 各組大鼠血清ALT、AST檢測
            2.3.3 各組大鼠血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ檢測
            2.3.4 各組大鼠肝組織中HyP含量測定
            2.3.5 各組大鼠肝組織病理形態(tài)學檢查
            2.3.6 免疫組織化學染色檢測各組肝組織a-SMA及5-LO的表達
            2.3.7 PCR檢測各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表達
            2.3.8 蛋白質印跡(WesternBlot)檢測各組α-SMA,5-LO,TIMP1、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c的蛋白質表達
        2.4 統(tǒng)計學處理
    3 實驗結果
        3.1 各組大鼠肝重指數(shù)的結果比較
        3.2 各組大鼠血清ALT、AST的結果比較
        3.3 各組大鼠血清HA、LN、PCⅢ及CIV結果比較
        3.4 各組大鼠肝組織Hyp結果比較
        3.5 各組大鼠肝組織病理學結果比較
            3.5.1 各組大鼠肝組織HE染色結果比較
            3.5.2 各組大鼠肝組織Masson染色結果比較
        3.6 各組大鼠肝組織免疫組織化學染色結果比較
            3.6.1 各組大鼠肝組織α-SMA免疫組織化學染色結果比較
            3.6.2 各組大鼠肝組織5-LO免疫組織化學染色結果比較
            3.6.3 各組大鼠肝組織α-SMA、5-LO免疫組織化學染色結果定量比較
        3.7 各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表達PCR檢測結果比較
            3.7.1 各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表達PCR檢測的熔解、擴增曲線
            3.7.2 各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表達PCR檢測結果比較
        3.8 各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表達WesternBlot檢測的結果比較
            3.8.1 各組大鼠肝組織5-LO、α-SMA蛋白表達WesternBlot檢測結果比較
            3.8.2 各組大鼠肝組織TIMP-1、MMP13蛋白表達WesternBlot檢測結果比較
            3.8.3 各組大鼠肝組織TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表達WesternBlot檢測結果比較
    4 實驗討論
        4.1 肝纖維化從脾腎論治的探討
            4.1.1 病機
            4.1.2 治法
            4.1.3 方藥
        4.2 雄芍湯防治肝纖維化的作用的探討
            4.2.1 雄芍湯抗肝纖維化作用的前期研究
            4.2.2 本實驗雄芍湯防治肝纖維化的作用的研究
        4.3 雄芍湯防治肝纖維化的作用機制
            4.3.1 雄芍湯防治肝纖維化與肝細胞
            4.3.2 雄芍湯防治肝纖維化與肝星狀細胞
            4.3.3 雄芍湯防治肝纖維化與5-脂氧合酶
            4.3.4 雄芍湯防治肝纖維化作用與TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
        4.4 結論與啟示
    參考文獻
第三部分 雄芍湯對大鼠肝細胞凋亡的影響
    1 實驗材料
        1.1 含藥血清
        1.2 細胞株
        1.3 主要試劑及儀器
    2 實驗方法
        2.1 調(diào)整各組含藥血清的濃度
        2.2 大鼠肝細胞培養(yǎng)與傳代
        2.3 流式細胞術檢測雄芍湯含藥血清對大鼠肝細胞凋亡的影響
            2.3.1 實驗方案
            2.3.2 流式細胞術檢測
        2.4 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 各組大鼠肝細胞凋亡情況
        3.2 各組大鼠肝細胞凋亡統(tǒng)計學比較
    4 實驗討論
    參考文獻
創(chuàng)新點與局限性
結語
附錄
    1 文獻綜述
        參考文獻
    2 在讀博士期間發(fā)表論文、科研情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清ALT、AST和GGT水平檢測在肝臟疾病診斷中的應用價值[J]. 仝靜.  河南醫(yī)學研究. 2017(22)
[2]肝臟損傷新的血清學標志物的研究進展[J]. 宋華峰,胥萍.  世界華人消化雜志. 2017(30)
[3]死亡受體家族調(diào)控程序性壞死的分子機制研究進展[J]. 李健,范錚,張立亞,王勇強,王兵.  嶺南急診醫(yī)學雜志. 2017(05)
[4]肝纖維化從腎論治探討[J]. 陳春宇,于崢,陳小野.  中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2017(09)
[5]血清ALT、AST、GGT檢測在肝臟疾病診斷中應用研究[J]. 崔紅權.  國際檢驗醫(yī)學雜志. 2017(16)
[6]扶正化瘀膠囊抗肝纖維化的臨床療效與作用機制研究進展[J]. 羅婷,高鑫,甘龍禹,汪濤,楊文鳳,涂燕云.  湖南中醫(yī)雜志. 2016(11)
[7]肝纖維化藥物治療的研究進展[J]. 李亞芳,霍麗娟.  國際消化病雜志. 2016(04)
[8]國外肝纖維化診斷的研究熱點分析[J]. 張弘,陶森,郝彧,趙紫薇,劉妮波,王泓午.  首都醫(yī)科大學學報. 2016(01)
[9]大黃蟅蟲丸在肝病領域中的臨床與實驗研究現(xiàn)狀[J]. 謝永財,胡國信.  中國中西醫(yī)結合消化雜志. 2015(12)
[10]復方鱉甲軟肝片治療慢性乙型肝炎患者對血清肝纖維化指標的影響[J]. 宮嫚,辛紹杰,鄒正升,李潤東,徐慶會,韓寶英,于建國,于德航,司雁菱,王憲波,候愛畫,李秀惠,陳菊梅.  實用肝臟病雜志. 2015(06)



本文編號：3726929