背景太白楤木是一種在我國(guó)中西部秦嶺大巴山脈及其余脈有著豐富野生資源的藥用植物。皂苷類化合物是其發(fā)揮藥理作用的主要成分。我們前期研究發(fā)現(xiàn)太白楤木總皂苷在D-半乳糖誘導(dǎo)的大鼠衰老模型中有很好的抗衰老作用,而在太白楤木總皂苷中,含有較高比率的竹節(jié)參皂苷Ⅳa（CHS）,并有良好的抗氧化作用。大量的研究表明氧化應(yīng)激與衰老密切相關(guān),那么CHS能否通過(guò)其出色的抗氧化能力起到抗衰老的作用呢?另外,我們前期研究表明CHS具有激活A(yù)MPK的作用,而AMPK又可以調(diào)控自噬,越來(lái)越多的證據(jù)顯示通過(guò)調(diào)節(jié)自噬能夠調(diào)節(jié)衰老,那么我們有理由推斷CHS能夠通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK從而調(diào)控自噬來(lái)調(diào)節(jié)衰老。為了解決上述這些疑問(wèn)和推斷,我們建立了兩種有效誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的模型,從氧化應(yīng)激和自噬兩個(gè)方面研究了CHS的抗衰老作用,為有效深入開發(fā)太白楤木及其活性成分提供了方向和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。目的通過(guò)建立過(guò)氧化氫（H₂O₂）誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEFs）衰老以及MEFs復(fù)制性衰老模型,研究太白楤木中主要成分竹節(jié)參皂苷Ⅳa的抗衰老作用及機(jī)制。方法1.取Balb/c孕鼠,分離小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF... 

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
1 材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑
2 方法
    2.1 MEFs細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞凍存
    2.3 細(xì)胞活力測(cè)定（MTT實(shí)驗(yàn)）
    2.4 細(xì)胞總ROS測(cè)定
    2.5 細(xì)胞線粒體ROS測(cè)定
    2.6 衰老相關(guān)的 β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色
    2.7 Western blot
    2.8 MDC染色
    2.9 腺病毒轉(zhuǎn)染
    2.10 自噬小體的觀察
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的衰老的保護(hù)作用
        3.1.1 CHS和H_2O_2對(duì)MEFs細(xì)胞活力的影響
        3.1.2 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞總ROS水平影響
        3.1.3 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的線粒體ROS水平影響
        3.1.4 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老的SA-β-gal染色的影響
        3.1.5 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老的相關(guān)標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響
        3.1.6 CHS對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老的氧化應(yīng)激通路蛋白Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM的影響
    3.2 CHS對(duì)MEFs復(fù)制性衰老的保護(hù)作用
        3.2.1 CHS對(duì)MEFs細(xì)胞活力的影響
        3.2.2 不同濃度CHS對(duì)MEFs細(xì)胞自噬的影響
        3.2.3 CHS（5μg·mL~(-1)）處理不同時(shí)間對(duì)MEFs細(xì)胞自噬的影響
        3.2.4 MEFs細(xì)胞復(fù)制性衰老模型的建立
        3.2.5 MEFs細(xì)胞復(fù)制性衰老模型中自噬情況
        3.2.6 CHS對(duì)能夠抗MEFs細(xì)胞衰老
        3.2.7 CHS對(duì)復(fù)制性衰老MEFs細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用
        3.2.8 CHS對(duì)復(fù)制性衰老MEFs細(xì)胞自噬相關(guān)通路的影響
        3.2.9 CHS通過(guò)AMPK/mTOR/ULK1通路誘導(dǎo)自噬
        3.2.10 Compound C對(duì)CHS抗衰老作用的影響
4 討論
    4.1 H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老模型中CHS的抗衰老作用
    4.2 復(fù)制性衰老模型中CHS的抗衰老作用
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]太白楤木的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 李成全,周健,徐洲,秦緒軍,湯海峰.  中南藥學(xué). 2017(10)
[2]畬藥山里黃根中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量測(cè)定[J]. 王偉影,毛菊華,余華麗,李水福.  中國(guó)藥師. 2015(09)
[3]竹節(jié)參化學(xué)成分研究[J]. 吳兵,陳新,張長(zhǎng)春,任曉慧,任雪琴.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2012(08)
[4]珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量測(cè)定[J]. 鄧翀,宋小妹,蔡寶昌.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2011(04)



本文編號(hào)：3647693