目的:通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)手段找到適用于藥材全蝎含量測定的目標(biāo)蛋白質(zhì)及其特征肽段,用該特征肽段形成定量方法。方法:全蝎粉碎后經(jīng)PBS緩沖溶液超聲提取并過濾后,得到藥材的蛋白質(zhì)提取溶液。上述溶液經(jīng)胰蛋白酶酶解后通過高分辨質(zhì)譜進(jìn)行分析,確定待測的目標(biāo)蛋白質(zhì)（β-肌動蛋白）和與之對應(yīng)的特征肽段（IIAPPER）,并進(jìn)行特征肽段及其同位素內(nèi)標(biāo)物(IIA*(¹³C₃,¹⁵N)PPER)的合成。用得到特征肽段做對照品,同位素內(nèi)標(biāo)物做內(nèi)標(biāo)進(jìn)行含量測定。色譜柱為Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm,1.8μm）,流動相為0.1%甲酸溶液（V/V）-水和乙腈,梯度洗脫。質(zhì)譜使用電噴霧離子源（ESI）正離子模式,采用多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）進(jìn)行信號采集。定量方法為內(nèi)標(biāo)法。結(jié)果:β-肌動蛋白的特征肽段在0.1～40 nmol/L濃度范圍內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)（r²）在0.999以上。方法檢出限為0.04 mg/kg,定量限為0.13 mg/kg。加標(biāo)回收率在87%～93%,重復(fù)性的... 

【文章來源】：世界中醫(yī)藥. 2020,15(13)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

對照品的MRM、TIC譜圖

供試品的MRM、TIC譜圖

方法空白的MRM、TIC譜圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3630465