目的:探討芒柄花黃素對人胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖、凋亡的影響及可能機(jī)制。方法:用含不同濃度（0、20、40、80μmol/L）芒柄花黃素的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株MGC-803后,MTT法觀察不同濃度芒柄花黃素對MGC-803細(xì)胞增殖的影響。Hoechst 33258染色法觀察不同濃度的芒柄花黃素對細(xì)胞核形態(tài)的影響。流式細(xì)胞計數(shù)法觀察細(xì)胞凋亡情況。熒光定量PCR實驗檢測細(xì)胞BAX、BCL-2 m RNA表達(dá)情況。Western blotting檢測不同藥物濃度作用下細(xì)胞的p-AKT、AKT、BAX和BCL-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:MTT法結(jié)果顯示,0、20、40、80μmol/L芒柄花黃素分別作用MGC-803細(xì)胞24、48、72 h后,細(xì)胞的增殖抑制率越來越高,表現(xiàn)出劑量與時間依賴性（P<0.05）。Hoechst 33258熒光染色、流式細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示,隨著藥物濃度增加,細(xì)胞凋亡率逐漸升高。Real-time PCR結(jié)果顯示,隨著芒柄花黃素濃度升高,MGC-803細(xì)胞的BAX m RNA相對表達(dá)量逐漸升高,BCL-2 m RNA相對表達(dá)量逐漸降低（P<0.01）。... 

【文章來源】：中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展. 2020,23(08)

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【部分圖文】：

MTT法檢測芒柄花黃素對MGC-803細(xì)胞增殖抑制率的影響

芒柄花黃素培養(yǎng)MGC-803細(xì)胞48h后，隨藥物濃度增加，MGC-803細(xì)胞BCL-2mRNA相對表達(dá)水平逐漸降低，BAX mRNA相對表達(dá)水平逐漸增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見圖4。2.5 不同藥物濃度對MGC-803細(xì)胞中p-AKT、AKT、BAX和BCL-2蛋白表達(dá)情況的影響

細(xì)胞凋亡通路主要包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路和線粒體通路，而線粒體通路在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中占主導(dǎo)地位[14]。線粒體凋亡途徑主要由BCL-2家族成員所調(diào)控，BAX基因發(fā)揮促凋亡作用，而BCL-2基因作用正相反，因此BCL-2 mRNA、BCL-2蛋白表達(dá)水平下降，BAX mRNA、BAX蛋白表達(dá)水平上升可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這與本研究MTT和Hoechst 33258染色結(jié)果一致，提示胃癌MGC-803增殖抑制率上升與BAX表達(dá)上升、BCL-2表達(dá)下降有關(guān)。AKT信號通路在胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移中具有重要的作用[15]。AKT是PI3K下游的關(guān)鍵蛋白，主要由PH結(jié)構(gòu)域、催化結(jié)構(gòu)域和調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中當(dāng)PH結(jié)構(gòu)域發(fā)生突變或缺失后會使AKT活性降低甚至喪失�；罨腁KT是一個關(guān)鍵的致瘤因素，它能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖[16]。本研究結(jié)果表明，PAKT mRNA、PAKT蛋白隨芒柄花黃素濃度上升而表達(dá)量呈現(xiàn)下降趨勢，故我們推測胃癌MGC-803細(xì)胞的凋亡可能與AKT信號通路激活有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3620610