樺褐孔菌多糖(IOP)是從傳統(tǒng)中藥樺褐孔菌當(dāng)中提取、分離的多糖類成分,具有廣泛的生物活性。本試驗室前期研究表明,IOP具有顯著的體內(nèi)抗弓形蟲和免疫增強(qiáng)等功能。但對于IOP的體外抗弓形蟲機(jī)制研究尚不明確。因此,本試驗將對IOP對于弓形蟲速殖子體外感染的RAW264.7巨噬細(xì)胞中NF-κB和MAPK兩個信號通路調(diào)控機(jī)制做研究。本試驗將巨噬細(xì)胞RAW264.7作為試驗對象,研究IOP對弓形蟲感染的RAW264.7巨噬細(xì)胞中炎癥因子表達(dá)水平及基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。通過檢測NF-κB以及MAPK信號途徑中關(guān)鍵性蛋白的表達(dá),從分子免疫水平探討IOP的抗弓形蟲免疫調(diào)控機(jī)制,為IOP的研發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。首先,本試驗首先采用MTT法確定IOP的安全試驗劑量。試驗結(jié)果顯示,0～180μg/mL的IOP無明顯的細(xì)胞毒性作用(P>0.05)。因此,本試驗擬定IOP的高、中、低組中IOP的濃度分別為100μg/mL、50 μg/mL和25 μg/mL。ELISA法檢測RAW264.7各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中相關(guān)炎癥因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ及TNF-α的表達(dá)調(diào)控水平。RT-PCR方法檢測...

【文章來源】： 延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 弓形蟲概述
        1.1 弓形蟲生物學(xué)特征
        1.2 弓形蟲病的流行特點
        1.3 弓形蟲病的癥狀及病理變化
        1.4 弓形蟲病的治療現(xiàn)狀
    2 炎性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        2.1 炎癥概述
        2.2 細(xì)胞因子
        2.3 核因子κB(NF-κB)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        2.4 MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    3 弓形蟲感染與相關(guān)信號通路之間關(guān)系
    4 中藥抗炎免疫調(diào)控
        4.1 免疫概述
        4.2 臨床抗炎免疫藥的分類
        4.3 抗炎免疫中藥研究進(jìn)展
    5 樺褐孔菌及樺褐孔菌多糖研究進(jìn)展
        5.1 樺褐孔菌概述
        5.2 樺褐孔菌多糖藥理學(xué)作用
    6 研究目的及意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 試驗細(xì)胞
        1.2 試驗藥物及試劑配制
        1.3 試驗主要試劑
        1.4 試驗主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 試驗前細(xì)胞處理
        2.2 藥物處理與試驗分組
        2.3 MTT法確定樺褐孔菌多糖的安全劑量
        2.4 ELISA法測定細(xì)胞因子含量
        2.5 Trizol法提取細(xì)胞總RNA
        2.6 激光共聚焦法測定通路關(guān)鍵蛋白活性
        2.7 Western Blot法測定轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)
        2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理
結(jié)果
    1 IOP安全劑量確定
    2 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞因子表達(dá)的影響
        2.1 細(xì)胞上清液中IL-1β的表達(dá)
        2.2 細(xì)胞上清液中IL-6的表達(dá)
        2.3 細(xì)胞上清液中TNF-α的表達(dá)
        2.4 細(xì)胞上清液中IFN-γ的表達(dá)
        2.5 細(xì)胞上清液中IL-4的表達(dá)
    3 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞炎性因子及趨化因子mRNA表達(dá)的影響
        3.1 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞IL-1β mRNA表達(dá)的影響
        3.2 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞IL-6 mRNA表達(dá)的影響
        3.3 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)的影響
        3.4 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞MCP-1 mRNA表達(dá)的影響
        3.5 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞MIP-1α mRNA表達(dá)的影響
    4 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞NF-κB通路蛋白表達(dá)的影響
        4.1 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞TLR2蛋白表達(dá)的影響
        4.2 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)的影響
        4.3 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞p-IKKα/β、p-IKBα蛋白表達(dá)的影響
        4.4 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞漿蛋白中NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響
        4.5 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞核蛋白中NF-κB p65蛋白的表達(dá)影響
        4.6 IOP對弓形蟲感染細(xì)胞核蛋白中NF-κB p65活性影響
    5 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞MAPK通路蛋白表達(dá)的影響
        5.1 IOP對弓形蟲感染RAW264.7細(xì)胞p-p38、p-JNK與p-ERK蛋白表達(dá)的影響
        5.2 IOP對弓形蟲感染細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子AP-1(c-jun)活性影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃芪甲苷改善大鼠急性腦梗死神經(jīng)運動功能及對梗死側(cè)大腦皮層中NF-κB p65及IKKβ蛋白的影響 [J]. 付蓓蓓,鄭永強(qiáng),徐悅.  中國中醫(yī)急癥. 2019(01)
[2]基于IKKβ/NF-κ B信號通路探討丹紫康膝沖劑對大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎的影響 [J]. 唐琦,董大立.  中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育. 2018(22)
[3]我國人群和某些動物弓形蟲感染研究進(jìn)展 [J]. 張越,王華琳,丁瑩瑩,李嬌,鮑麗,段萍,陳啟軍,姜寧.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2018(10)
[4]益氣養(yǎng)陰逐瘀方對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞炎癥模型體外抗炎活性的影響 [J]. 唐蕾,吳堅,于顧然,儲繼紅,嚴(yán)士海,王海丹,戴國梁,韓旭.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2019(01)
[5]臭牡丹大黃素對臭氧應(yīng)激小鼠模型TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)作用 [J]. 曾丹,劉莉,譚眉靈,謝瑋,盧善翃,李俊輝,向陽,秦曉群.  中藥新藥與臨床藥理. 2018(05)
[6]巨噬細(xì)胞極化與微生物感染進(jìn)程 [J]. 張蓮,劉棟華.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2018(05)
[7]樺褐孔菌發(fā)酵產(chǎn)物對雞生長性能和部分免疫指標(biāo)的影響 [J]. 李海燕,林冬梅,丁志勇,于森,黃艷艷,楊少華,張琳,吳家強(qiáng).  華北農(nóng)學(xué)報. 2017(S1)
[8]消退素在炎癥相關(guān)疾病中減輕炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制[J]. 崔術(shù)楠,姚尚龍,尚游.  中華危重病急救醫(yī)學(xué). 2017 (04)
[9]中藥免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展 [J]. 周悅芳,范培紅.  時珍國醫(yī)國藥. 2017(01)
[10]淫羊藿總黃酮通過抑制MAPK/NF-κB信號通路減輕自然衰老大鼠腦組織炎癥反應(yīng) [J]. 宋來新,張長城,王婷,劉珍財,韓貴芳,袁丁,趙海霞.  中國藥理學(xué)通報. 2017(01)

博士論文
[1]17-β雌二醇調(diào)控綿羊輸卵管上皮細(xì)胞β-防御素1基因表達(dá)過程中NF-κB信號通路的研究[D]. 溫世勇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué). 2014
[2]創(chuàng)傷后線粒體DNA活化巨噬細(xì)胞NF-κB通路引起全身炎癥反應(yīng)綜合征的研究[D]. 張建政.中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院. 2012
[3]三葉草肽Ⅲ（TFF3）調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及其新的負(fù)反饋調(diào)節(jié)子扭蛋白Twist的機(jī)制：TFF3與腫瘤壞死因子作用的比較[D]. 朱亞勤.中國醫(yī)科大學(xué). 2006
[4]跨膜型TNF-α正向與反向信號在活化誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制[D]. 王晶.華中科技大學(xué). 2006
[5]NF-κB p50、p65和IκBα與食管鱗癌發(fā)生和浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其作用機(jī)制的研究[D]. 李道明.鄭州大學(xué). 2005
[6]CCK-8對炎癥反應(yīng)中促炎及抗炎性細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究[D]. 倪志宇.河北醫(yī)科大學(xué). 2005
[7]LPS致新生大鼠急性肺損傷促炎性細(xì)胞因子、抗炎性細(xì)胞因子和NF-κB變化及N-乙酰半胱氨酸干預(yù)作用的研究[D]. 金婧.中國醫(yī)科大學(xué). 2004
[8]MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在重癥急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用[D]. 施新崗.第二軍醫(yī)大學(xué). 2004
[9]枯否細(xì)胞在嚴(yán)重?zé)齻缙赥NFα、IL-1β、IL-6產(chǎn)生中的作用及調(diào)控[D]. 王光毅.第二軍醫(yī)大學(xué). 2001

碩士論文
[1]本芴醇對弓形蟲抑制作用研究[D]. 王大為.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué). 2016
[2]ANK1基因在弓形蟲生長發(fā)育中的作用研究[D]. 刁慧艷.華中農(nóng)業(yè)大學(xué). 2016
[3]黃芪總黃酮對RAW264.7細(xì)胞NF-κB信號通路調(diào)控作用的研究[D]. 郭澤.延邊大學(xué). 2016
[4]IL-1β誘導(dǎo)人角膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和IL-8的分子機(jī)制及地塞米松對其抑制作用的研究[D]. 周衛(wèi)萍.浙江大學(xué). 2015
[5]弓形蟲ROP18激酶抑制宿主NF-κB信號通路的分子機(jī)制研究[D]. 蔣宗儒.安徽醫(yī)科大學(xué). 2015
[6]樺褐孔菌多糖對小鼠免疫細(xì)胞的影響[D]. 姜雨薇.延邊大學(xué). 2014
[7]樺褐孔菌多糖對感染不同毒株弓形蟲小白鼠AP-1部分信號因子的影響研究[D]. 姚琳.延邊大學(xué). 2013
[8]補(bǔ)體C5a在細(xì)菌感染性炎癥中對IL-8分泌的調(diào)節(jié)研究[D]. 王立燕.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院. 2010
[9]高血流肺血管重建中內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB的活性研究[D]. 于曉曉.山東大學(xué). 2010
[10]剛地弓形蟲RH株速殖子在鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的實驗觀察[D]. 李冬娜.蘇州大學(xué). 2010



本文編號：3551401