麥冬皂苷D誘導(dǎo)CYP2J3增強(qiáng)SERCA2a/PLB相互作用的分子機(jī)制
發(fā)布時(shí)間：2021-12-02 16:39
目的:中藥麥冬是麥冬Ophiopogon japonicus（L.f.）的干燥塊根,是中醫(yī)臨床常用中藥,以其為主要成分的參麥注射液在臨床主要用于治療心血管疾病。麥冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）是麥冬以及參麥注射液中的重要有效成分,具有心血管保護(hù)作用。CYP2J在心血管系統(tǒng)方面具有重要作用,CYP2J3轉(zhuǎn)基因大鼠的心肌細(xì)胞活力明顯增強(qiáng),SERCA2a(Ca2+-ATPase2a)作為多種心力衰竭的關(guān)鍵分子,已被證實(shí)心衰患者的SERCA2a活性及表達(dá)降低。課題組前期工作發(fā)現(xiàn)麥冬皂苷D可通過CYP2J/EETs系統(tǒng)促進(jìn)SERCA2a的表達(dá)。本研究以麥冬中重要單體成分麥冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）為研究對(duì)象,對(duì)其心肌保護(hù)作用的藥理作用及可能的分子機(jī)制進(jìn)行研究。結(jié)果顯示OPD可通過誘導(dǎo)CYP2J3,增強(qiáng)SERCA2a與PLB之間的相互作用,增強(qiáng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣調(diào)蛋白SERCA2a活性,增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子水平,改善大鼠心肌細(xì)胞心衰癥狀。本研究從OPD誘導(dǎo)CYP2J為基礎(chǔ),首次證實(shí)OPD通過誘導(dǎo)CYP2J增強(qiáng)SERCA2a與PLB（Phosphola...
【文章來源】：廣東藥科大學(xué)廣東省
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
麥冬皂苷D對(duì)H9c2大鼠心肌細(xì)胞活力的影響(x±s，n=4)，與對(duì)照組相比，P＜
苷 D 對(duì) H9c2 大鼠心肌細(xì)胞活力的影響( x ±s，n=4)，與對(duì)0.05;**P＜0.01;***P＜0.001t of OPD on H9c2 cells( x ±s,n=4).*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜with the CON group皂苷 D 誘導(dǎo) H9c2 細(xì)胞中 CYP2J3 的表達(dá)0.5μM、1μM 的 OPD 作用大鼠心肌細(xì)胞 24h 后，OPRNA 表達(dá)（P＜0.001）。采用 Western blot 檢測(cè) OPD 對(duì)結(jié)果如圖 1-2（a）所示，OPD 誘導(dǎo) CYP2J3 蛋白表達(dá)衰模型，本實(shí)驗(yàn)采用采用 1μM ISO 誘導(dǎo)心力衰竭模型 共同處理細(xì)胞 24h，觀察病理?xiàng)l件下 CYP2J3 的 mRN結(jié)果如圖 1-2（b）所示，ISO 模擬心力衰竭細(xì)胞模型胞內(nèi) CYP2J3 表達(dá)降低（P＜0.001），OPD 能逆轉(zhuǎn)細(xì)胞降低（P＜0.001）。a
1-2（b） 麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3 表達(dá)的影響( x ±s，n=4)，與對(duì)照組相比，***P＜0.001；與 ISO 處理組相比，##P＜0.01;###P＜0.001Fig.1-2(b) Effect of OPD on the expression of CYP2J3 in H9c2 cells( x ±s,n=4).***P＜0.001compared with the control group .##P＜0.01;###P＜0.001 compared with the ISO group..3.3 CYP2J3 敲低與過表達(dá)后，麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3 表達(dá)的影響前部分實(shí)驗(yàn)已證明麥冬皂苷 D 可明顯誘導(dǎo) CYP2J3 的表達(dá)并能逆轉(zhuǎn) ISO 所致 CYP2J 下調(diào)，本部分實(shí)驗(yàn)觀察 CYP2J3 敲低與過表達(dá)后，麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3達(dá)的影響。檢測(cè) siRNA 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi) CYP2J3 的蛋白表達(dá)，如圖 1-3（a）所示，陰性對(duì)照組相比，siRNA-CYP2J3 組的蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)：成功構(gòu) CYP2J3 低表達(dá)細(xì)胞模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行打下基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)染 siRNA 后 12h，1μMPD 以及 1μM OPD+1μM ISO 作用細(xì)胞 24h，檢測(cè) CYP2J3 表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：與對(duì)照組相比，OPD 也能顯著誘導(dǎo) CYP2J3 表達(dá)(P<0.01)，雖然 CYP2J3 整表達(dá)水平低于 CYP2J3 正常表達(dá)細(xì)胞。在心力衰竭細(xì)胞模型中，與各自對(duì)照組比，在 CYP2J3 正常表達(dá)與低表達(dá)條件下均能顯著增加 CYP2J3 表達(dá)（P<0.05），圖 1-3（b）。
本文編號(hào)：3528797
【文章來源】：廣東藥科大學(xué)廣東省
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
麥冬皂苷D對(duì)H9c2大鼠心肌細(xì)胞活力的影響(x±s，n=4)，與對(duì)照組相比，P＜
苷 D 對(duì) H9c2 大鼠心肌細(xì)胞活力的影響( x ±s，n=4)，與對(duì)0.05;**P＜0.01;***P＜0.001t of OPD on H9c2 cells( x ±s,n=4).*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜with the CON group皂苷 D 誘導(dǎo) H9c2 細(xì)胞中 CYP2J3 的表達(dá)0.5μM、1μM 的 OPD 作用大鼠心肌細(xì)胞 24h 后，OPRNA 表達(dá)（P＜0.001）。采用 Western blot 檢測(cè) OPD 對(duì)結(jié)果如圖 1-2（a）所示，OPD 誘導(dǎo) CYP2J3 蛋白表達(dá)衰模型，本實(shí)驗(yàn)采用采用 1μM ISO 誘導(dǎo)心力衰竭模型 共同處理細(xì)胞 24h，觀察病理?xiàng)l件下 CYP2J3 的 mRN結(jié)果如圖 1-2（b）所示，ISO 模擬心力衰竭細(xì)胞模型胞內(nèi) CYP2J3 表達(dá)降低（P＜0.001），OPD 能逆轉(zhuǎn)細(xì)胞降低（P＜0.001）。a
1-2（b） 麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3 表達(dá)的影響( x ±s，n=4)，與對(duì)照組相比，***P＜0.001；與 ISO 處理組相比，##P＜0.01;###P＜0.001Fig.1-2(b) Effect of OPD on the expression of CYP2J3 in H9c2 cells( x ±s,n=4).***P＜0.001compared with the control group .##P＜0.01;###P＜0.001 compared with the ISO group..3.3 CYP2J3 敲低與過表達(dá)后，麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3 表達(dá)的影響前部分實(shí)驗(yàn)已證明麥冬皂苷 D 可明顯誘導(dǎo) CYP2J3 的表達(dá)并能逆轉(zhuǎn) ISO 所致 CYP2J 下調(diào)，本部分實(shí)驗(yàn)觀察 CYP2J3 敲低與過表達(dá)后，麥冬皂苷 D 對(duì) CYP2J3達(dá)的影響。檢測(cè) siRNA 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi) CYP2J3 的蛋白表達(dá)，如圖 1-3（a）所示，陰性對(duì)照組相比，siRNA-CYP2J3 組的蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)：成功構(gòu) CYP2J3 低表達(dá)細(xì)胞模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行打下基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)染 siRNA 后 12h，1μMPD 以及 1μM OPD+1μM ISO 作用細(xì)胞 24h，檢測(cè) CYP2J3 表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：與對(duì)照組相比，OPD 也能顯著誘導(dǎo) CYP2J3 表達(dá)(P<0.01)，雖然 CYP2J3 整表達(dá)水平低于 CYP2J3 正常表達(dá)細(xì)胞。在心力衰竭細(xì)胞模型中，與各自對(duì)照組比，在 CYP2J3 正常表達(dá)與低表達(dá)條件下均能顯著增加 CYP2J3 表達(dá)（P<0.05），圖 1-3（b）。
本文編號(hào)：3528797
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