目的:通過(guò)建立風(fēng)寒濕痹證膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）小鼠模型、大鼠模型,培養(yǎng)風(fēng)寒濕痹證CIA模型大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織中成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）,應(yīng)用近紅外熒光活體成像技術(shù),圍繞TLR4/NF-κB信號(hào)通路,從“滑膜組織-滑膜細(xì)胞-信號(hào)通路-靶向基因”角度,多層次地整體探究風(fēng)濕寧治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的藥效作用機(jī)制。方法:第一部分,不同外感致病因素對(duì)病證結(jié)合CIA模型建立的比較研究。將110只SPF級(jí)雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組（10只）、CIA模型組（40只）、風(fēng)寒濕痹證CIA模型組（30只）、風(fēng)濕熱痹證CIA模型組（30只）。采用風(fēng)寒濕、風(fēng)濕熱外感致病因素刺激,結(jié)合牛II型膠原乳化劑誘導(dǎo)的方法,建立CIA模型、風(fēng)寒濕痹證CIA模型、風(fēng)濕熱痹證CIA模型。分別采用療效確切的驗(yàn)方風(fēng)濕寧(18.24g·kg^-1)與治痹經(jīng)方烏頭湯(4.9g·kg^-1)、白虎加桂枝湯(10.15g·kg^-1),對(duì)這三種RA模型加以治療。運(yùn)用以方測(cè)證的反證法和比較醫(yī)學(xué)手段的正證法,觀察模型大鼠的足掌溫度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹度、血... 

【文章來(lái)源】：成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：139 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞表
引言
第一部分 不同外感致病因素對(duì)病證結(jié)合CIA模型建立的比較研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑
            1.2.1 治痹經(jīng)方
            1.2.2 風(fēng)濕寧
            1.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 RA大鼠模型的建立
        2.2 RA大鼠模型的分組及給藥
        2.3 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè)
            2.3.1 大鼠一般狀態(tài)觀察
            2.3.2 大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分
            2.3.3 大鼠關(guān)節(jié)腫脹度檢測(cè)
            2.3.4 大鼠血清RF、ACPA含量檢測(cè)
            2.3.5 大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 各組大鼠一般狀態(tài)的觀察結(jié)果
            3.1.1 各組大鼠造模后一般狀態(tài)變化
            3.1.2 各組大鼠用藥治療后一般狀態(tài)變化
        3.2 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間體質(zhì)量變化
        3.3 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間足掌溫度變化
        3.4 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間關(guān)節(jié)炎指數(shù)變化
        3.5 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間關(guān)節(jié)腫脹度變化
        3.6 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間血清RF、ACPA含量變化
        3.7 各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察結(jié)果
    4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    5 討論
        5.1 治痹經(jīng)方的選擇及意義
        5.2 病證結(jié)合CIA模型的建立及評(píng)價(jià)
        5.3 風(fēng)濕寧對(duì)三種CIA模型的影響
            5.3.1 風(fēng)濕寧對(duì)CIA模型大鼠體質(zhì)量的影響
            5.3.2 風(fēng)濕寧對(duì)CIA模型大鼠足掌溫度的影響
            5.3.3 風(fēng)濕寧對(duì)CIA模型大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)與關(guān)節(jié)腫脹度的影響
            5.3.4 風(fēng)濕寧對(duì)CIA模型大鼠血清RF、ACPA的影響
            5.3.5 風(fēng)濕寧對(duì)CIA模型大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)的影響
第二部分 近紅外熒光探針在風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型中成像的應(yīng)用研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑
            1.2.1 風(fēng)濕寧與來(lái)氟米特
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型的建立及給藥
            2.1.1 小鼠熱板反應(yīng)篩選
            2.1.2 動(dòng)物分組
            2.1.3 模型制備
            2.1.4 給藥方法
        2.2 指標(biāo)檢測(cè)
            2.2.1 小鼠一般狀態(tài)觀察
            2.2.2 小鼠足掌疼痛閾值檢測(cè)
            2.2.3 小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分
            2.2.4 小鼠關(guān)節(jié)腫脹度檢測(cè)
            2.2.5 近紅外熒光小鼠活體成像觀察
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型一般狀態(tài)的影響
        3.2 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型足掌疼痛閾值的影響
        3.3 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響
        3.4 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型踝關(guān)節(jié)寬度的影響
        3.5 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA小鼠模型近紅外熒光活體成像的影響
    4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    5 討論
        5.1 陽(yáng)性藥物的選擇
        5.2 風(fēng)濕寧對(duì)模型小鼠足掌疼痛閾值的影響
        5.3 風(fēng)濕寧對(duì)模型小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)與踝關(guān)節(jié)寬度的影響
        5.4 風(fēng)濕寧對(duì)模型小鼠近紅外熒光活體成像的影響
第三部分 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4/NF-κB信號(hào)通路的作用機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑
            1.2.1 風(fēng)濕寧與來(lái)氟米特
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型的建立及篩選
        2.2 風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型的分組及給藥
        2.3 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè)
            2.3.1 大鼠一般情況觀察
            2.3.2 大鼠血清RF、ACPA、IL-1β、IL-4、IL-10與TNF-α含量檢測(cè)
            2.3.3 大鼠脾臟與胸腺指數(shù)檢測(cè)
            2.3.4 大鼠膝、踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察及評(píng)分
            2.3.5 大鼠滑膜組織中細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.3.6 大鼠滑膜組織中c-IAP1、XIAP、Caspase-3與Caspase-9免疫組化檢測(cè)
            2.3.7 大鼠滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA表達(dá)檢測(cè)
            2.3.8 大鼠滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達(dá)檢測(cè)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型一般狀態(tài)的影響
        3.2 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響
        3.3 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型關(guān)節(jié)腫脹度的影響
        3.4 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型血清RF、ACPA含量的影響
        3.5 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型血清炎性細(xì)胞因子含量的影響
        3.6 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型血清抗炎細(xì)胞因子含量的影響
        3.7 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型脾臟與胸腺指數(shù)的影響
        3.8 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型膝、踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)及評(píng)分的影響
            3.8.1 各組大鼠膝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察及評(píng)分結(jié)果
            3.8.2 各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察及評(píng)分結(jié)果
        3.9 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織細(xì)胞凋亡的影響
        3.10 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中c-IAP1、XIAP、Caspase-3與Caspase-9免疫組化表達(dá)的影響
        3.11 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA相對(duì)表達(dá)量的影響
        3.12 風(fēng)濕寧對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達(dá)的影響
    4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    5 討論
        5.1 風(fēng)濕寧的來(lái)源及方析
        5.2 風(fēng)濕寧通過(guò)下調(diào)炎性細(xì)胞因子表達(dá),上調(diào)抗炎細(xì)胞因子活性,是發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一
        5.3 風(fēng)濕寧通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能,是發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一
        5.4 風(fēng)濕寧可誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞調(diào)亡,抑制滑膜細(xì)胞異常增殖,是發(fā)揮其治療作用的主要機(jī)制之一
        5.5 風(fēng)濕寧可抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路異�；罨�,是發(fā)揮其治療作用的主要機(jī)制之一
第四部分 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)風(fēng)寒濕痹證CIA-FLS增殖、凋亡和TLR4/NF-κB信號(hào)通路的作用機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 滑膜組織來(lái)源
        1.2 制備含藥血清的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑
            1.3.1 風(fēng)濕寧與來(lái)氟米特
            1.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 風(fēng)寒濕痹證CIA模型大鼠滑膜細(xì)胞體外分離培養(yǎng)
            2.1.1 CIA-FLS細(xì)胞原代培養(yǎng)
            2.1.2 CIA-FLS細(xì)胞傳代
            2.1.3 CIA-FLS細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.1.4 CIA-FLS細(xì)胞凍存
            2.1.5 CIA-FLS細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2 CIA-FLS細(xì)胞免疫熒光鑒定
        2.3 含藥血清的制備
        2.4 CIA-FLS細(xì)胞分組及給藥
        2.5 CCK-8法檢測(cè)CIA-FLS細(xì)胞增殖
        2.6 TUNEL法檢測(cè)CIA-FLS細(xì)胞凋亡
        2.7 ELISA法檢測(cè)CIA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量
        2.8 Real-time PCR法檢測(cè)CIA-FLS細(xì)胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA表達(dá)
        2.9 Western Blot法檢測(cè)CIA-FLS細(xì)胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達(dá)
        2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 CIA-FLS細(xì)胞原代培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察
        3.2 CIA-FLS細(xì)胞免疫熒光鑒定
        3.3 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)CIA-FLS細(xì)胞增殖的影響
        3.4 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)CIA-FLS細(xì)胞凋亡的影響
        3.5 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)CIA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量的影響
        3.6 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)CIA-FLS細(xì)胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響
        3.7 風(fēng)濕寧含藥血清對(duì)CIA-FLS細(xì)胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達(dá)的影響
    4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    5 討論
        5.1 CIA-FLS細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定
        5.2 風(fēng)濕寧含藥血清通過(guò)抑制CIA-FLS細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡,是發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一
        5.3 風(fēng)濕寧含藥血清通過(guò)下調(diào)CIA-FLS細(xì)胞上清液中炎性細(xì)胞因子表達(dá),上調(diào)抗炎細(xì)胞因子活性,是發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一
        5.4 風(fēng)濕寧含藥血清通過(guò)抑制CIA-FLS細(xì)胞中TLR4/NF-κB信號(hào)通路異�；罨�,是發(fā)揮其治療作用的主要機(jī)制之一
結(jié)論
創(chuàng)新性與特色
問(wèn)題與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述 TLRs/NF-κB信號(hào)通路與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】：
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