目的:探究半枝蓮醇提物對(duì)結(jié)直腸干細(xì)胞自我更新和分化的影響并闡明其分子作用機(jī)制。方法:慢病毒轉(zhuǎn)染結(jié)腸腫瘤HT-29細(xì)胞,磁珠抗體標(biāo)記法分選結(jié)腸干細(xì)胞;用CCK-8法檢測(cè)半枝蓮對(duì)腫瘤干細(xì)胞的活性;3D培養(yǎng)法、干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)、瓊脂糖集落實(shí)驗(yàn)探究半枝蓮對(duì)HT-29^Smo-CSC的生長(zhǎng)更新及其轉(zhuǎn)化的影響。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)半枝蓮對(duì)非經(jīng)典Hedgehog信號(hào)通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其標(biāo)記基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影響。結(jié)果:半枝蓮能抑制HT-29^Smo-CSC活性、生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化及成球能力,顯著下調(diào)Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表達(dá),上調(diào)Sufu,下調(diào)Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表達(dá)。結(jié)論:半枝蓮醇提物能抑制HT-29^Smo-CSC的增殖和分化,對(duì)非經(jīng)典Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵靶基因和蛋白有顯著抑制作用,提示半枝蓮能通過(guò)非經(jīng)典Hedgehog信號(hào)通路抑制結(jié)直... 

【文章來(lái)源】：中藥材. 2020,43(03)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

HT-29Smo-CSC細(xì)胞的建立

結(jié)果如圖5所示,與溶劑對(duì)照組比較,半枝蓮1 000、500 μg/mL組HT-29Smo-CSC細(xì)胞分化狀態(tài)差,高濃度幾乎不分化,而半枝蓮250 μg/mL組及GANT-61組細(xì)胞分化狀態(tài)較好,細(xì)胞活力較好,分化明顯。表2 半枝蓮對(duì)HT-29Smo-CSC細(xì)胞成球能力的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度 球形成率/% 溶劑對(duì)照組 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝蓮組 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61組 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:與溶劑對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01

腫瘤干細(xì)胞是一群具有自我更新和分化能力的腫瘤細(xì)胞,自從1994年從人急性髓性白血病研究中被證實(shí)以來(lái)[9],越來(lái)越多的腫瘤干細(xì)胞在實(shí)體瘤中如腦癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等被發(fā)現(xiàn)[10]。研究認(rèn)為結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞是導(dǎo)致結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要因素,因此研究結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物,探索其作用機(jī)制,是靶向治療結(jié)直腸癌的關(guān)鍵�？勺鳛榻Y(jié)腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次實(shí)驗(yàn)采用免疫磁珠分選法,所獲得的目的細(xì)胞純度較高以及對(duì)細(xì)胞損傷較小,從流式檢測(cè)結(jié)果看來(lái),經(jīng)磁珠分選的HT-29Smo-細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)93.56%,表明所獲得的干細(xì)胞純度較高。圖4 半枝蓮對(duì)HT-29Smo-CSC細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化的影響(×200)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)直腸癌中Hedgehog信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J]. 王華,李奇奇,朱子清,楊進(jìn),陳爾飛.  生命的化學(xué). 2018(05)
[2]中藥半枝蓮有效成分抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 吳曉龍,崔思遠(yuǎn),王琰,徐瑞榮.  中華中醫(yī)藥雜志. 2018(04)
[3]基于Hedgehog信號(hào)通路的野黃芩苷抑制HT-29細(xì)胞源性結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞體外自我更新的研究[J]. 熊思會(huì),萬(wàn)莎,譚溧,雷楠,盧小路,沈小鋼,周麗娟,徐海波.  中藥藥理與臨床. 2017(05)
[4]結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞相關(guān)因子研究進(jìn)展[J]. 曲澤,侯明星,王峰.  中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù). 2017(03)
[5]半枝蓮抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 滿其倩,左琳,呂青濤.  遼寧中醫(yī)雜志. 2015(11)
[6]半枝蓮?fù)ㄟ^(guò)Hedgehog信號(hào)通路抑制結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞自我更新[J]. 盧小路,徐海波,石夢(mèng)瑩,史玉榮,周麗娟,王德健,陳繼蘭,方皓,譚溧,周雪.  中藥藥理與臨床. 2015(01)



本文編號(hào)：3343020