云南松（Pinus yunnanensis）花粉多糖及硫酸酯化多糖在體外細(xì)胞水平上的研究較多,實(shí)驗(yàn)室前期的實(shí)驗(yàn)表明松花粉多糖及硫酸酯化多糖能夠在體外促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖并活化其免疫作用,且表明能夠通過(guò)細(xì)胞周期阻滯的方式抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖。本實(shí)驗(yàn)對(duì)松花粉多糖及硫酸酯化多糖的抗腫瘤作用及免疫影響進(jìn)行研究,將體外與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)合起來(lái)進(jìn)行探究,建立小鼠H22肝癌移植模型,并且對(duì)小鼠血清進(jìn)行核磁共振分析,結(jié)合代謝組學(xué)分析荷瘤小鼠在松花粉多糖及酯化多糖作用前后對(duì)體外H22細(xì)胞、荷瘤小鼠血清細(xì)胞因子及血清中的代謝物質(zhì)的影響,共同探究酯化前后的松花粉在抗腫瘤方面的作用及差異。一、對(duì)云南松花粉多糖進(jìn)行提取、檢測(cè)以及純化。對(duì)多糖的提取采用的是熱水浸提法,利用三氯乙酸去除蛋白質(zhì),用不同濃度的乙醇進(jìn)行分級(jí)沉淀,得到60%的乙醇所沉淀出來(lái)的多糖,并將其命名為PPM60。對(duì)其進(jìn)行多糖含量的測(cè)定,測(cè)得多糖含量為44.02%。利用常壓制備色譜技術(shù)對(duì)PPM60進(jìn)行分離純化,并得到五個(gè)多糖組分,同樣利用常壓色譜技術(shù)對(duì)得到的五個(gè)多糖組分進(jìn)行純度檢測(cè),最終選用純度及活性較合適的第三組分,并將其命名為PC。二、對(duì)PC進(jìn)... 

【文章來(lái)源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 綜述
    1 松花粉
    2 多糖和硫酸酯化多糖以及其在抗腫瘤方面的研究現(xiàn)狀
        2.1 多糖及其研究現(xiàn)狀
        2.2 硫酸化多糖及其研究現(xiàn)狀
    3 基于核磁共振(NMR)技術(shù)的代謝組學(xué)
    4 本課題的研究基礎(chǔ),研究目的及研究意義
第二章 松花粉粗多糖的分離純化、硫酸酯化以及檢測(cè)
    1 材料與試劑
    2 儀器與設(shè)備
    3 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.1 制備云南松花粉多糖
        3.2 破壁松花粉粗多糖含量的測(cè)定
        3.3 常壓制備色譜分析技術(shù)分離純化松花粉粗多糖
        3.4 對(duì)分離純化的松花粉粗多糖進(jìn)行純度檢測(cè)
        3.5 制備磺化試劑
        3.6 松花粉多糖的硫酸酯化、脫氨以及純化
        3.7 硫酸酯化多糖取代度的檢測(cè)
        3.8 紅外光譜檢測(cè)
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 松花粉多糖含量為44.02%
        4.2 松花粉多糖的分離結(jié)果
        4.3 松花粉多糖的純度檢測(cè)
    5 松花粉多糖(PC)的硫酸酯化及紅外光譜檢測(cè)
        5.1 硫酸酯化多糖(SPC)取代度為1.7
        5.2 PC和 SPC紅外光譜檢測(cè)
    6 討論
第三章 多糖酯化前后對(duì)H22細(xì)胞活性、細(xì)胞遷移以及細(xì)胞周期的影響
    1 材料和試劑
    2 儀器與設(shè)備
    3 方法步驟
        3.1 試劑配制
        3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.4 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)
        3.5 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)H22 細(xì)胞周期
        3.6 熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)基因mRNA表達(dá)量
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 MTT結(jié)果表明PC和 SPC均能抑制H22 細(xì)胞的增殖
        4.2 PC和 SPC對(duì) H22 細(xì)胞劃痕愈合能力具有抑制作用
        4.3 PC和 SPC引起H22 細(xì)胞周期阻滯
        4.4 多糖酯化前后對(duì)H22 細(xì)胞周期有關(guān)基因表達(dá)量的影響
    5 討論
第四章 多糖酯化前后對(duì)H22荷瘤小鼠的影響
    1 材料與試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞系
        1.2 主要試劑及儀器
    2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與小鼠腹水傳代
        2.2 BALB/C小鼠H22 肝癌移植模型建立
        2.3 預(yù)實(shí)驗(yàn)
        2.4 正式實(shí)驗(yàn)
        2.5 小鼠血清細(xì)胞因子的測(cè)定
        2.6 小鼠血清核磁共振(~1H-NMR)預(yù)處理
        2.7 ~1H-NMR實(shí)驗(yàn)條件及譜圖分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 多糖及硫酸酯化多糖對(duì)荷瘤小鼠瘤重的影響
        3.2 血清中細(xì)胞因子的測(cè)定
        3.3 血清核磁共振(1H-NMR)檢測(cè)
        3.4 核磁差異性代謝物分析
        3.5 代謝通路分析
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]松花粉硫酸酯化多糖作用于RAW264.7細(xì)胞表面受體的研究[D]. 李慧.山東師范大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3184714