目的:廣地龍為我國(guó)常用的動(dòng)物類藥材,在我國(guó)最早的中藥學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中就已收載,其藥用歷史十分悠久,具有清熱抗炎、抗驚厥、溶栓、平喘、利尿等功效,廣泛應(yīng)用于哮喘等呼吸道疾病的治療。雖然廣地龍有良好的平喘功效,但關(guān)于其抗哮喘分子機(jī)制的報(bào)道甚少。因此,本研究擬構(gòu)建原代大鼠氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）的增殖模型,通過研究廣地龍對(duì)ASMC增殖的影響作用,從細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)水平探索廣地龍治療哮喘中氣道重塑的作用靶點(diǎn)和作用途徑,為廣地龍開發(fā)新的治療靶點(diǎn)和臨床合理應(yīng)用提供相關(guān)的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）的實(shí)驗(yàn)中,在無菌條件下從SPF級(jí)雄性SD大鼠分離出氣管,并小心翼翼剝除結(jié)締組織和脂肪,采用組織塊法培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）,根據(jù)成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的貼壁時(shí)間不同,采用差速法純化,并以熒光免疫反應(yīng)鑒定其純度。構(gòu)建大鼠氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）增殖模型的實(shí)驗(yàn)中,取第3～6代的ASMC,以組胺（Hist）作為大鼠氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）增殖模型的誘導(dǎo)劑,選用四甲基偶氮唑鹽法（MTT）考察Hist誘導(dǎo)ASMC增殖的成模濃度與時(shí)間范圍。探索廣地龍對(duì)平... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?１?ＴＧＦ－?Ｐ?／ｓｍａｄｓ信號(hào)途徑機(jī)制示意圖??１．１．２．?２ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依賴通路（圖１．２）：?ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依賴通路是氣道重??塑的重要通路之一

纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致氣道重塑。??圖１．２?ＮＦ－?ｋ?Ｂ信號(hào)通路機(jī)制７Ｆ意圖??１．１．２．３?ＭＡＰＫｓ通路（圖１．３）：?ＭＡＰＫｓ通路主要是通過促進(jìn)ＡＳＭＣ異常增殖，且??釋放多種活性成分，從而參與氣道重塑的發(fā)生和發(fā)展。ＭＡＰＫ是一個(gè)絲氨酸／蘇氨酸激??酶家族，主要將細(xì)胞外刺激信號(hào)從細(xì)胞膜表面?zhèn)鲗?dǎo)至細(xì)胞核內(nèi)，有三個(gè)部分構(gòu)成：ＥＲＫ、??ｐ３８和ＪＮＫ。ＥＲＫ部分是細(xì)胞增殖、分化、存活的關(guān)鍵的調(diào)控信號(hào)；ｐ３８和ＪＮＫ參與細(xì)??胞應(yīng)激和凋亡的調(diào)節(jié)。冃前研究認(rèn)為，主要誘導(dǎo)ＡＳＭＣ進(jìn)行分裂的因子包括：①生長(zhǎng)??因子：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子－３（ＴＧＦ－?Ｐ?）、表皮生長(zhǎng)因子（ＥＧＦ）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（ＰＤＧＦ）、??胰島素樣生長(zhǎng)因子（ＩＧＦ）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；②炎癥介質(zhì)：內(nèi)皮素－１?（ＥＴ－?１）、??白三烯Ｄ?４?（ＬＴＩ）?４）、血栓素Ａ?２?（ＴＸＡ?２）；③細(xì)胞因子：ＩＬ＿?１１和ＩＬ－?６；④酶：??ａ－凝血酶、溶酶體水解酶等。不同的促有絲分裂因子可與不同的受體結(jié)合發(fā)揮傳遞??信號(hào)的作用ｗ，生長(zhǎng)因子是通過催化蛋白質(zhì)酪氨酸殘基磷酸化而誘導(dǎo)ＡＳＭＣ的有絲分??裂，一些炎癥介質(zhì)與Ｇ－蛋白耦聯(lián)型受體（ＧＰＣＲ）相結(jié)合發(fā)揮作用，而細(xì)胞因子是經(jīng)細(xì)??胞表面與Ｓｒｃ相耦聯(lián)的糖蛋白受體傳遞信號(hào)，不Ｎ途徑傳遞的信號(hào)都是以ｐ２１ｒａＳ?（?—??鐘單體ＧＴＰ結(jié)合蛋白）為聚合點(diǎn)？，然后ｐ２１ｍＳ分別與下游的ｒａｆ－?１或磷脂酰肌??５??

，＿用，可改善組胺引發(fā)的豚鼠哮喘病情和舒張痙攣的離體氣道組織，而對(duì)Ａｃｈ所誘導(dǎo)??鼠哮喘無療效［４°］。??１．２．?１．３纖溶作用??上皮下纖維化作為哮喘氣道重塑的一個(gè)重要的病理生理學(xué)變化，其形成與細(xì)胞外??質(zhì)（ＥＣＭ）的生成，堆積和降解有關(guān)。而纖溶酶和基質(zhì)金屬蛋白酶（ＭＭＰｓ）是參與??控細(xì)胞外基質(zhì)的沉淀和水解的關(guān)鍵性蛋白酶。首先，在麗Ｐ依賴型膠原水解之前，??溶酶從ＥＣＭ中降解糖蛋白；其次，纖溶酶可直接活化ＭＭＰｓ促進(jìn)ＥＣＭ的降解［４１］；最??，纖溶酶也可以通過拮抗匪Ｐ抑制物減少ＥＣＭ的沉淀。??研宄表明，地龍具有活化纖溶酶作用和直接降解纖維蛋白的纖溶酶樣作用，可使??血液中優(yōu)球蛋白的纖溶活性增加和降解時(shí)間縮短。Ｍｉｈａｒａ是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)地龍水提物能??揮直接降解纖維蛋白和活化纖溶酶原的作用，并將其稱為蚓激酶［４２］，廣地龍因其較??的纖溶作用而起到控制或扭轉(zhuǎn)氣道重塑的上皮下纖維化。??為了便于了解近年來地龍藥理作用，本文利用簡(jiǎn)化過后的圖表將其藥理作用進(jìn)行??了總結(jié)和梳理，詳見下圖（圖１．４）。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3120836