目的:補體系統(tǒng)介導的細胞損傷是腎小球疾病發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。蘇木作為一種傳統(tǒng)中藥,具抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗菌和免疫抑制等多種功效。課題組前期研究首次發(fā)現(xiàn)原蘇木素A對C5b-9介導的足細胞損傷具有保護作用,但其分子機制尚不明確。本研究通過體外構建C5b-9攻擊足細胞損傷模型,基于蛋白質組學技術,評價原蘇木素A對C5b-9介導的足細胞損傷保護作用及潛在分子機制。方法:構建C5b-9膜攻擊復合物足細胞損傷模型,用不同濃度的原蘇木素A處理,CCK-8法檢測原蘇木素A對足細胞增殖的影響,免疫熒光法檢測原蘇木素A對足細胞標志蛋白Nephrin的表達和細胞定位的影響,流式檢測原蘇木素A對足細胞凋亡的影響,iTRAQ蛋白質組學方法檢測原蘇木素A作用后的蛋白質組變化,篩選差異表達蛋白,進行GO功能富集分析和KEGG Pathway富集分析,并對差異表達蛋白進行PPI互作網(wǎng)絡分析,揭示原蘇木素A對足細胞損傷保護作用的潛在分子機制,同時Western blot方法驗證相關差異蛋白的表達變化。結果:（1）足細胞在原蘇木素20、40、80、160μmol/L處理組增殖明顯,在濃度為80μmol/L時足細胞... 

【文章來源】：黑龍江省中醫(yī)藥科學院黑龍江省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

原蘇木素A對足細胞增殖的影響

圖 2 原蘇 木 素 A 對足 細 胞 Ne p h r in 蛋白 表達 的 影響 。圖 （ A ） 空 白 對照 組 ，圖 （ B ） 原蘇 木 素 A 處理 組 ，圖 （C ） C 5b - 9 模型 組 Ne p h r in 是足 細 胞特 異 性蛋 白 ，一 種 跨 膜蛋 白 ，免 疫熒 光 結 果 顯示 （ 如 圖 2） ，正 常 情況 下 （圖 2 A ），N e p h r in 表 達于 足 細胞 的胞 膜 和胞 質 ，彌 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 擊下 ， 足細 胞 數(shù)量 和密 度 減小 ，細 胞 核萎 縮 ，N e p h r in 表達 明顯 減 少（ 圖 2 C） ，提 示足 細 胞 損 傷嚴 重 ；在 原蘇 木 素 A 作用 下 （ 圖 2 B ），N e p h r in 表達 明 顯高 于模 型 組， 足 細胞 形 態(tài) 和 結構 更接 近 空白 對 照 組， 說 明 原 蘇木 素 對 C5 b - 9 介導 的 足 細 胞損 傷 有 保 護作 用 。 3. 3 原 蘇木 素 A 對足 細 胞 凋 亡的 影 響

2 原蘇 木 素 A 對足 細 胞 Ne p h r in 蛋白 表達 的 影響 。圖 （ A ） 空 白 對照 組 ，圖 （ 原蘇 木 素 A 處理 組 ，圖 （C ） C 5b - 9 模型 組 e p h r in 是足 細 胞特 異 性蛋 白 ，一 種 跨 膜蛋 白 ，免 疫熒 光 結 果 顯示 （ 如 圖 2） ，正 （圖 2 A ），N e p h r in 表 達于 足 細胞 的胞 膜 和胞 質 ，彌 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 擊下 數(shù)量 和密 度 減小 ，細 胞 核萎 縮 ，N e p h r in 表達 明顯 減 少（ 圖 2 C） ，提 示足 細 胞 ；在 原蘇 木 素 A 作用 下 （ 圖 2 B ），N e p h r in 表達 明 顯高 于模 型 組， 足 細胞 形 態(tài) 接 近 空白 對 照 組， 說 明 原 蘇木 素 對 C5 b - 9 介導 的 足 細 胞損 傷 有 保 護作 用 。 3 原 蘇木 素 A 對足 細 胞 凋 亡的 影 響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]蟲草素對補體復合物介導的足細胞損傷的保護作用[J]. 洪濤,崔路可,文集,張明華,樊均明.  四川大學學報(醫(yī)學版). 2015(02)
[2]足細胞靶向治療蛋白尿性腎臟病的新時代[J]. 王建中.  中華腎病研究電子雜志. 2014(01)
[3]亞溶量C5b-9與足細胞損傷及其信號傳導的研究進展[J]. 盧宏柱,周建華.  臨床兒科雜志. 2008(01)



本文編號：3088704