目的:本研究選擇正常及肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型大鼠為研究對象,以白藜蘆醇為工具藥物,考察肝纖維化疾病模型下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對UGTs代謝酶表達及活性的影響;通過在體外孵育實驗中分別加入UGT1A1特異性抑制劑膽紅素、UGT1A7和UGT1A9的選擇性抑制劑厚樸酚,和UGT1A9特異性抑制劑尼氟酸,考察通過大鼠肝微粒體和細胞裂解酶介導(dǎo)的白藜蘆醇體外孵育實驗中,起主要作用的UGTs亞型;通過構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型細胞及阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路模型細胞,研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對白藜蘆醇II相代謝影響的分子機制。本研究的結(jié)果將為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響藥物代謝的相關(guān)研究提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ),也為白藜蘆醇在臨床上安全、合理、有效應(yīng)用提供科學(xué)指導(dǎo)。方法:本實驗首先建立大鼠肝纖維化所引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激動物模型,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激HepG2細胞模型及阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的HepG2細胞模型;采用UPLC-PDA法對白藜蘆醇及其代謝產(chǎn)物進行定量分析;建立葡萄糖醛酸化代謝反應(yīng)體外孵育模型,通過水解法求出白藜蘆醇的代謝產(chǎn)物與母藥之間的轉(zhuǎn)換因子;用Western blot法測定并比較正常組及模型組大鼠,正常及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細胞模型,阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路細... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

白藜蘆醇及其UGTs代謝物的UPLC-PDA色譜圖

圖 2-1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相應(yīng)通路在正常及模型組大鼠肝中蛋白的相對表達。數(shù)據(jù)均來自 3 次行實驗，組間差異用 Student’s t 檢驗分析，*p<0.05，***p<0.001。5.2 肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對大鼠 UGTs 蛋白表達的影響這部分數(shù)據(jù)考察肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型是否改變 UGTs 蛋白表平。實驗數(shù)據(jù)顯示，如圖 2-2 所示，與正常組相比，模型組大鼠肝臟中 UGT1A1UGT1A7 表達分別增高 2.21，1.90 倍，差異非常顯著（p<0.01）。

圖 2-1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相應(yīng)通路在正常及模型組大鼠肝中蛋白的相對表達。數(shù)據(jù)均來自 3 次平行實驗，組間差異用 Student’s t 檢驗分析，*p<0.05，***p<0.001。5.2 肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對大鼠 UGTs 蛋白表達的影響這部分數(shù)據(jù)考察肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型是否改變 UGTs 蛋白表水平。實驗數(shù)據(jù)顯示，如圖 2-2 所示，與正常組相比，模型組大鼠肝臟中 UGT1A1，UGT1A7 表達分別增高 2.21，1.90 倍，差異非常顯著（p<0.01）。


本文編號：3005451