目的:參附湯是治療缺血性心臟病的臨床常用經(jīng)典名方,主要用治心腎陽虛、陽虛氣弱證缺血性心臟病,其療效已得到廣泛的臨床證實(shí)。但因參附湯有效成分復(fù)雜多樣,其對缺血性心肌的保護(hù)作用機(jī)制研究尚不深入。前期實(shí)驗(yàn)中已知參附湯有效成分中的人參皂苷Rg1、Re、烏頭原堿Aconine單體及配伍對心肌細(xì)胞鈣離子的有效調(diào)控作用,本實(shí)驗(yàn)研究從抗氧化應(yīng)激角度探討三種單體及配伍對缺氧復(fù)氧損傷H9C2心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及分子機(jī)制。主要檢測指標(biāo)包括抗氧化蛋白酶類Prx-3、SOD2,活性氧（ROS）,促細(xì)胞凋亡因子Bax以及抗氧化相關(guān)上游信號通路因子Nrf-2。通過觀察各種氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白活性變化,探討參附湯三種有效成分及配伍對抗氧化相關(guān)蛋白標(biāo)志物的調(diào)控作用及機(jī)制,以期從微觀角度豐富參附湯對缺血性心肌病的保護(hù)作用機(jī)制,為參附湯益氣溫陽治療缺血性心臟病的中醫(yī)藥理論提供現(xiàn)代科學(xué)證據(jù)。研究結(jié)果顯示,Rg1/Re配伍組能夠上調(diào)Prx-3/SOD2表達(dá)并降低ROS生成水平;Rg1/Aconine配伍組能夠激活Nrf-2信號通路并下調(diào)ROS水平;Aconine組可以上調(diào)Prx-3表達(dá)并降低ROS水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)參附湯三種有效成... 

【文章來源】：北京中醫(yī)藥大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

缺氧24H復(fù)氧3H對H9C2細(xì)胞生存率的影響(N=8)

確定細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷造模條件后,我們將細(xì)胞分組加藥預(yù)培養(yǎng),造模前鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)均處于良好狀態(tài),然后嚴(yán)格按照造模條件進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理。在收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)之前,我們顯微鏡下選用20倍鏡,對細(xì)胞形態(tài)拍照記錄。見圖2:3.3各有效組成分濃度組對缺氧復(fù)氧損傷H9C2細(xì)胞內(nèi)Prx-3蛋白表達(dá)的影響

鏡下肉眼觀察各組細(xì)胞形態(tài),判斷各組藥物對缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。為了進(jìn)一步客觀證明參附湯三種有效成分對缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,我們將分組培養(yǎng)于100mm培養(yǎng)皿并造模完成的細(xì)胞在低溫環(huán)境下收集,并進(jìn)行細(xì)胞蛋白提取,然后采用蛋白免疫印跡法測定各組細(xì)胞的Prx-3活性水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),缺氧復(fù)氧損傷模型組細(xì)胞Prx-3水平明顯下降(P<0.05,N=6),用藥各組均不同程度的提高了缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞的Prx-3水平,如圖3所示。雖然用藥各組均呈現(xiàn)了保護(hù)趨勢,但Rg1+HR組、Re+HR組、Re+Aconine+HR組、Rg1+Re+Aconine+HR組對缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞Prx-3水平的影響并無明顯差異(P>0.05,N=6);只有Aconine+HR、Rg1+Re+HR、Rg1+Aconine+HR組則明顯提高了缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的Prx-3水平(P<0.01,N=6)。3.3.2細(xì)胞免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)Prx-3水平

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2992870