發(fā)布時(shí)間：2021-01-11 22:57

　　本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、臺(tái)盼藍(lán)/TUNEL/DAPI染色、ROS熒光標(biāo)記、定點(diǎn)突變、免疫細(xì)胞化學(xué)分析、Western blot分析等細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)和方法;以PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,綜合研究了離體鎘染毒模型中白藜蘆醇調(diào)控鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞NOX2-ROS介導(dǎo)Akt-Erk1/2通路抗凋亡分子機(jī)理。結(jié)果如下:1白藜蘆醇抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞NOX2依賴的ROS抗凋亡PC12細(xì)胞和小鼠原代神經(jīng)元用白藜蘆醇（100 μM）預(yù)處理1 h后暴露鎘（10和20 μM）12 h或24 h、或用ROS清除劑NAC（5 mM）聯(lián)合白藜蘆醇（100 μM）預(yù)處理1 h后再用鎘處理12 h或24 h。免疫熒光染色分析細(xì)胞內(nèi)NOX2表達(dá),ROS熒光探針CM-H2DCFDA分析細(xì)胞內(nèi)ROS水平,TUNEL和DAPI檢測(cè)細(xì)胞凋亡,Caspase-3/7活性分析,Western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示:白藜蘆醇顯著抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞NOX2及Caspase的活性升高;NAC加強(qiáng)白藜蘆醇對(duì)于鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞NOX2及其調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)上調(diào)、ROS水平升高和凋亡發(fā)生的抑制效果。提示:白藜蘆醇抑制鎘誘導(dǎo)... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＮＯＸ２及其調(diào)節(jié)蛋白示意圖＿??

??Ｃｄ?州?〇?〇?１０?１０?２０?２０??圖４－１白藜蘆醇抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞ＮＯＸ２表達(dá)和凋亡性細(xì)胞死亡??Ｆｉｇ．?４－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?ｔｈｅ?ＮＯＸ２?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ??ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｄｍｉｕｍ??Ａ：?ＰＣ１２細(xì)胞和原代神經(jīng)細(xì)胞用１００?ｇＭ白藜蘆醇預(yù)處理１?ｈ，暴露于鎘（１０和??２０?（ｉＭ）１２?ｈ、２４?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?分析顯不?ＮＯＸ２、Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ??蛋白表達(dá)變化；Ｂ：細(xì)胞Ｃａｓｐａｓｅ－３／７活性分析；Ｃ和Ｄ：免疫焚光染色及定量統(tǒng)??計(jì)分析。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（ｎ?＝?５）表示；ａＰ?＜?０．０５，與對(duì)照組比較；Ｖ?＜?０．０５，??與丨Ｏ＾ｉＭ鎘處理組比較；ｅＰ＜０．０５，與２０ｊａＭ鎘處理組比較。??

Ｃｄ?１０?Ｃｄ?１０?卩?Ｍ?？?？?？?？?＋?＋??圖５－１白藜蘆醇調(diào)控Ａｋｔ－Ｅｒｋｌ／２信號(hào)通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡??Ｆｉｇ．?５－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ?ａｇａｉｎｓｔ?Ｃｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｎｅｕｒａｌ?ｃｅｌｌｓ??ｔｈｒｏｕｇｈ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?Ａｋｔ－?Ｅｒｋｌ／２?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??Ａ：白藜蘆醇預(yù)處理１?ｈ后，暴露鎘１２?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)Ａｋｔ及其憐酸化水平；??８－０：八水加－八１＾和八￡＾＾？或八（１－１＾；２分別感染？（：１２細(xì)胞后，用白藜蘆醇（１００??ＨＭ）或?Ｕ０１２６?（５ｐＭ）預(yù)處理?１?ｈ?后暴露鎘（１０ｐＭ）?１２ｈ?或?２４ｈ。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ??檢測(cè)Ａｋｔ、Ｅｒｋｌ／２及其隣酸化和Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３表達(dá)（Ｂ）；臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)??胞存活率（Ｃ）；?ＴＵＮＥＬ檢測(cè)細(xì)胞凋亡表現(xiàn)（Ｄ）。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（ｎ?＝?５）??表示；ａＰ＜０．０５


本文編號(hào)：2971635