印度塊菌Tuberindicum是隸屬于子囊菌門的一類珍貴的地下生外生菌根真菌,具有重要的食藥用價值及生態(tài)價值,廣泛分布于我國多個地區(qū),是我國最主要的出口貿(mào)易食用菌之一。印度塊菌整個生活史漫長,地下菌絲、菌根及子實體的形成和發(fā)育各個階段幾乎都發(fā)生在地下,與土壤中的微生物發(fā)生緊密關系。研究表明,微生物在印度塊菌菌根形成及子實體發(fā)育、獨特芳香氣味形成等過程中發(fā)揮重要作用,但其具體作用機制還尚不明確。目前對我國不同地區(qū)的印度塊菌伴生微生物多樣性及其生態(tài)功能的相關研究還尚未開展。本文運用高通量測序技術結合傳統(tǒng)分離培養(yǎng)方法研究了不同地理分布區(qū)的印度塊菌子實體伴生微生物的組成和差異以及塊菌生長發(fā)育過程中不同部位的微生物多樣性,同時采用氣相色譜-質譜聯(lián)用(GC-MS)和高效液相色譜(HPLC)等方法比較分析了不同地區(qū)的印度塊菌子實體化學成分含量及其抗氧化活性,以期明確地理分布對印度塊菌伴生微生物、化學成分含量的影響,為將來對不同地區(qū)的印度塊菌質量評價標準的制定奠定理論基礎。主要研究結果如下:1,對我國西南、東北及華北地區(qū)的6個不同地區(qū)的印度塊菌子實體伴生細菌多樣性研究表明,印度塊菌子實體均被變形菌門Proteobacteria(36.90-80.79%)、厚壁菌門 Firmicutes(0.04%-37.20%)、擬桿菌門 Bacteroidetes(4.44-14.85%)等定殖,以慢生根瘤菌屬Bradyrhizobium為優(yōu)勢菌屬(2.66-47.66%),但細菌結構組成表現(xiàn)出地區(qū)差異性;此外,印度塊菌菌根中優(yōu)勢菌屬為鏈霉菌屬Streptomyces(4.65%)等,土壤中主要為鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas(3.12-6.26%)等。2,對不同地區(qū)的印度塊菌子實體中化學成分含量及抗氧化活性研究表明,云南曲靖的印度塊菌子實體中游離糖(23.67mg/gdw)、總酚類(4.46 mg/gdw)、黃酮類化合物(2.31mg/gdw)含量最高,清除DPPH自由基(EC50值為0.93±0.11 mg/mL)和ABTS自由基活性(EC50值為0.68±0.13mg/mL)最強,西藏的印度塊菌中多糖含量最高(115.24mg/gdw);印度塊菌子實體中揮發(fā)性化合物成分主要為醇類(28.30-69.65%)、醛類(5.35-23.21%)、酮類(1.88-16.10%)、芳香族化合物(0-0.91%)以及含硫化合物(0-0.11%)等,其中1-辛烯-3-醇含量最高(26.74-59.72%),化合物組成及相對含量表現(xiàn)出地區(qū)差異性。3,從印度塊菌子實體中分離獲得了 60株可培養(yǎng)細菌,隸屬于4門24屬,以假單胞菌屬Pseudomonas sp.、糞產(chǎn)堿桿菌Alcaligenes sp.、微桿菌屬 Microbacterium sp.、節(jié)桿菌屬Arthobactersp.為優(yōu)勢類群。其中13株能在Burk's無氮培養(yǎng)基上生長,8株具有固氮酶基因,暗示其可能有固氮能力,1株具溶解無機磷能力,暗示其在印度塊菌發(fā)育過程中可能發(fā)揮重要作用。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S567.3;R284.1
【部分圖文】：

?第二章印度塊菌伴生微生物多樣性???ＨＫＡＳ１０４３７３－３７６、昭通市的樣品?ＨＫＡＳ８５２３４、ＨＫＡＳ８５２３７－ＨＫＡＳ８５２４０、??ＨＫＡＳ８５２４４、ＨＫＡＳ８５２５５、ＨＫＡＳ８５２６３、ＨＫＡＳ８５２６４，四川省涼山彝族自治州的??樣品ＨＫＡＳ６１０９０、ＨＫＡＳ６１０８６、ＨＫＡＳ６１０８８，西藏自治區(qū)林芝市的樣品??ＨＫＡＳ１０４３６７－ＨＫＡＳ１０４３６９，河北省遵化市的樣品?ＨＫＡＳ９６７７９－ＨＫＡＳ９６７８１，黑龍??江省齊齊哈爾市的樣品ＨＫＡＳ１０４２１２－ＨＫＡＳ１０４２１４，牡丹江市樣品??ＨＫＡＳ１０４２０８－ＨＫＡＳ１０４２１０，遼寧省朝陽市的樣品?ＨＫＡＳ１０４２１５－ＨＫＡＳ１０４２１６。??

圖２－２不同地區(qū)印度塊菌子實體宏觀及微觀形態(tài)特征Ａｌ－７為釆集于云南省怒江州貢山縣??（Ａ１）、河北�。ǎ粒玻�、遼寧�。ǎ粒常�、黑龍江省牡丹江市（Ａ４）、黑龍江省齊齊哈爾（Ａ５）、??云南省曲靖市（Ａ６）、西藏自治區(qū)（Ａ７）的印度塊菌子實體形態(tài)特征；Ｂ１－７為云南省怒江州??貢山縣（Ｂ１）、河北�。ǎ拢玻�、遼寧�。ǎ拢常�、黑龍江省牡丹江市（Ｂ４）、黑龍江省齊齊哈爾市??（Ｂ５）、云南省曲靖市（Ｂ６）、西藏自治區(qū)（Ｂ７）的印度塊菌孢子形態(tài)特征；Ａ８為遼寧的印??度塊菌釆樣地生境、Ｂ８為河北的印度塊菌釆樣地生境??Ｆｉｇ?２－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ａｎｄ?ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｃｈｉｎａ．?Ａｌ－７?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｄｅｒｕｎｇ－Ｎｕ??Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ?Ｃｏｕｎｔｙ?Ｇｏｎｇｓｈａｎ，?Ｙｕｎｎａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａｌ），?Ｈｅｂｅｉ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ２），?Ｌｉａｏｎｉｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ３），??Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ?ｃｉｔｙ，?Ｈｅｉｌｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ４），?Ｑｉｑｉｈａｒ?ｃｉｔｙ，?Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ５），?Ｑｕｊｉｎｇ，??Ｙｕｎｎａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ６），?Ｔｉｂｅｔ?（Ａ７）；?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ??

Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ?ｔｒｅｅ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ＩＴＳ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｒｅｇｉｏｎｓ．??ＡＨＢ１－ＨＢ３：?Ｈｅｂｅｉ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＨＬＮ１－ＬＮ３：?Ｌｉａｏｎｉｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?＃ＱＪ１－ＱＪ３：?Ｑｕｊｉｎｇ．?Ｙｕｎｎａｎ??ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＡＭＤＪ１－ＭＤＪ３：?Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ，?Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＯＧＳ１－ＧＳ３：?Ｇｏｎｇｓｈａｎ?ｃｏｕｎｔｙ，??Ｎｕｊｉａｎｇ，?Ｙｕｎａｎｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＤＸＺ２－１－ＸＺ２－３：?Ｌｉｎｚｈｉ?ｃｉｔｙ，?Ｔｉｂｅｔ；?ＴＱＱ２，?ＱＱ４：?Ｑｉｑｉｈａｒ，??Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?Ｖ?ＳＣ?１－３：?Ｌｉａｎｇｓｈａｎ，?Ｓｉｃｈｕａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ??釆用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ方法對我國不同地理位置的印度塊菌ｎｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列構??建系統(tǒng)發(fā)育樹，以Ｔ．ｔｏｒｃ／ｎＹ作為外類群（圖２－３）。結果表明，所有樣品在系統(tǒng)發(fā)??育樹上共同聚集在一個大的分枝上（Ｃｌａｄｅ?１），系統(tǒng)發(fā)育關系較為相近。??（二）不同地區(qū)印度塊菌子實體伴生細菌多樣性分析??基于ＩＵｕｍｉｎａ?ＨｉＳｅｑ測序平臺，對釆集于我國６個省的印度塊菌子實體伴生細??菌１６Ｓ?ｒＤＮＡ?Ｖ３＋Ｖ４片段測序，共獲得３９８１６９２對Ｒｅａｄｓ，拼接過濾后共產(chǎn)生??３４５０２９３條ｄｅａｎ?ｔａｇｓ。在９７％相似度下可將其聚類為用于物種分析的６９５個ＯＴＵｓ，??如表２－１所示。??２５??
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本文編號：2878766