短梗五加(Acanthopanax sessiliflorus)屬于藥食兩用植物,我國該植物資源廣闊,目前主要散布于吉林省長白山地區(qū)、黑龍江省、遼寧省等地,韓國、日本等地也有區(qū)域散布。Chiisanoside是短梗五加中分離出的一種三萜皂苷,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明chiisanoside能夠起到抗病毒、抗炎、抑制胰脂肪酶和抗糖尿病的作用。本文對(duì)短梗五加葉中有效成分chiisanoside的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化、富集并制備chiisanoside這一成分,并對(duì)其抗腫瘤活性及藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。采取效應(yīng)面法優(yōu)化短梗五加葉中活性化合物chiisanoside的提取工藝。在單因素實(shí)驗(yàn)探討的基礎(chǔ)上,通過Box-Behnken效應(yīng)面法研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間、液固比對(duì)提取工藝的影響。提取最優(yōu)條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)72%、超聲時(shí)間40min、固液比1:118。該條件下chiisanoside提取率為3.56%。大孔樹脂純化短梗五加葉中chiisanoside的工藝。通過靜態(tài)吸附與解吸附實(shí)驗(yàn)篩選7種型號(hào)的大孔樹脂,并對(duì)所選型號(hào)樹脂工藝參數(shù)進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示D101型大孔樹脂對(duì)chiisanoside的吸附與解吸附效果最佳,最優(yōu)條件為以含生藥0.2 g/mL、上樣體積為柱體積的5倍、用50%乙醇溶液洗脫、7倍柱體積的洗脫液來進(jìn)行最后洗脫。首次采取Box-Behnken效應(yīng)面法提取和大孔樹脂優(yōu)化富集工藝的聯(lián)用對(duì)目標(biāo)性成分chiisanoside的提取進(jìn)行優(yōu)化。在工藝優(yōu)化的基礎(chǔ)上,對(duì)5 kg短梗五加葉進(jìn)行提取、富集有效成分chiisanoside,純化后過硅膠柱,得到9.58 g樣品。純化后的化合物應(yīng)用于抗腫瘤藥理活性實(shí)驗(yàn)中,結(jié)果顯示chiisanoside能顯著抑制H22荷瘤小鼠實(shí)體瘤生長,對(duì)免疫器官?zèng)]有損害。給藥后血清細(xì)胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ均有所升高,而VEGF則受到抑制。此外,從HE、TUNEL染色和免疫組織化學(xué)分析中我們可以發(fā)現(xiàn)chiisanoside能夠使腫瘤細(xì)胞凋亡,其機(jī)制或許與上調(diào)Bax、Caspase-3,下調(diào)Bcl-2、VEGF有關(guān)。進(jìn)一步研究chiisanoside在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布,結(jié)果顯示chiisanoside在體內(nèi)吸收速度快。此外,chiisanoside在肝臟和小腸中含量最高,這表明chiisanoside對(duì)肝臟和小腸有良好的靶向性。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

1.2.1.1 色譜條件CXTH-3000 高效液相色譜儀，色譜柱為 Odyssll C18（200mm×4.6mm，5μm）相：乙腈-水（35:65，v/v）；流速：1mL·min-1；檢測(cè)波長：205nm；柱溫：40℃；20 μL。1.2.1.2 對(duì)照品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用甲醇精確配制 4mg/mL 的 chiisanoside 標(biāo)準(zhǔn)液，備用。吸取少量上述標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣 2、4、8、10、12 μL，按“1.2.1.1”項(xiàng)中的色譜條件進(jìn)行分析，以各體積對(duì)照液的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（x）來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸Y=2555799.70x-2144924.50（r2=0.9991），結(jié)果表明當(dāng)進(jìn)樣量在 8~28 μg 的范圍內(nèi)系良好。1.2.1.3 供試品溶液制備精密稱取短梗五加葉粉末 1.0 g，置于具塞三角瓶中，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)提取條梗五加葉進(jìn)行提取，提取液先在 3000 r/min 的條件下離心 10 min，再將上清液過 0濾膜，濾液作為供試品溶液。采用高效液相色譜法對(duì)供試品溶液中 chiisanoside 的行分析，每次進(jìn)樣 10 μL，樣品色譜圖如圖 1-1。

實(shí)驗(yàn)分別對(duì)乙醇的體積分?jǐn)?shù)、超聲提取的時(shí)間及液固比這 3 個(gè)因素采取考素對(duì) chiisanoside 提取率的影響。實(shí)驗(yàn)具體設(shè)計(jì)如下，即將乙醇的體積分%、30%、50%、70%及 90% 5 組，超聲時(shí)間分別為 5、15、30、60、90比為 1:20、1:40、1:80、1:100、1:120 和 1:150 這 6 組。實(shí)驗(yàn)中，固定 2 一因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)的考察并且每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次提取。.5 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)是在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，依據(jù) Box-Behnken 這一方素三水平的 17 個(gè)試驗(yàn)的響應(yīng)面分析并考察這 3 個(gè)因素對(duì)提取效果的影響n-Expert trial version 8.0.6 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果采取分析。 Chiisanoside 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì) chiisanoside 提取率的影響固定超聲提取時(shí)間為 60min，固液比為 1:120，乙醇的體積分?jǐn)?shù)依次設(shè)定為70%及 90%，進(jìn)行 5 組實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖 1-2。

圖 1-3 超聲提取的時(shí)間對(duì) chiisanoside 提取率的影響Fig.1-3 Effects of ultrasonic extraction time on extraction rate of chiisanoside 1-3 可知，在 5 ~ 30min，chiisanoside 的提取率隨時(shí)間的延長而顯著提 min 時(shí)，chiisanoside 含量達(dá)到峰值，30 min 以后 chiisanoside 含量隨著超慢下降。由于 30 ~ 120 min 時(shí) chiisanoside 的提取率變化不是很明顯，超聲提取的時(shí)間確定在 5 ~ 60 min 為宜。固液比對(duì) chiisanoside 提取率的影響乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50%，超聲提取的時(shí)間為60 min，固液比依次設(shè)定為:100、1:120 和 1:150，進(jìn)行 6 組實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖 1-4 所示。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2865840