目的探討金匱腎氣湯對單側輸尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠腎間質纖維化中氧化應激和自噬的影響。方法將24只雄性SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、金匱腎氣湯組(1.8 g·kg~(-1))、依那普利組(10 mg·kg~(-1));左側輸尿管結扎術后第1天開始灌胃給藥(10 mL·kg~(-1)),每日1次,第21天處死大鼠。取梗阻腎組織,采用Masson染色法觀察腎組織病理改變;化學熒光法檢測梗阻腎組織活性氧(ROS)含量;Western Blot法檢測NOX4、p22~(phox)、p47~(phox)、LC3II/I、p62、p-mTOR/mTOR及p-AMPK/AMPK等蛋白在梗阻腎組織中的表達。結果與假手術組比較,模型組大鼠梗阻腎組織間質膠原沉積增多,ROS含量顯著增高(P0.01),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表達顯著上調(diào)(P0.01),LC3II/LC3I蛋白表達比例顯著下調(diào)、p62蛋白表達顯著上調(diào)(P0.01),AMPK磷酸化顯著減少、mTOR磷酸化明顯增加(P0.01)。與模型組比較,金匱腎氣湯組大鼠梗阻腎組織間質膠原沉積減少,ROS含量顯著降低(P 0.05),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表達顯著下調(diào)(P 0.05),LC3II/LC3I蛋白表達比例上調(diào)、p62蛋白表達下調(diào)(P 0.05),AMPK磷酸化增加、mTOR磷酸化減少(P 0.05)。結論金匱腎氣湯可能通過抑制NOX4激活,進而通過AMPK-mTOR途徑促進梗阻腎組織自噬,從而改善UUO導致的腎間質纖維化。
【部分圖文】：

結果見圖1。與假手術組比較，模型組大鼠梗阻腎臟體積明顯增大，切面見腎盂明顯擴張積水、腎實質變薄，Masson染色顯示腎小管明顯擴張、間質內(nèi)膠原纖維明顯增加。與模型組比較，金匱腎氣湯組和依那普利組大鼠梗阻腎臟體積明顯縮小，腎盂擴張程度減輕，腎實質變厚，Masson染色顯示腎小管擴張減輕、腎間質膠原纖維明顯減少。金匱腎氣湯組與依那普利組的差異不明顯。結果表明，金匱腎氣湯可改善UUO大鼠腎間質纖維化。2.2 金匱腎氣湯對UUO大鼠梗阻腎組織氧化應激的影響

結果見圖3。與假手術組比較，模型組大鼠梗阻腎組織中LC3II/LC3I蛋白表達比例顯著下調(diào)，p62蛋白表達量顯著增加（P<0.01）。與模型組比較，金匱腎氣湯組和依那普利組大鼠梗阻腎組織中LC3II/LC3I蛋白表達比例顯著上調(diào)，p62蛋白表達量顯著下降（P<0.05）。結果表明，金匱腎氣湯和依那普利均可增加UUO大鼠梗阻腎組織自噬活性，兩者差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.4 金匱腎氣湯對UUO大鼠梗阻腎組織AMPK-m TOR信號通路的影響

結果見圖4。與假手術組比較，模型組大鼠梗阻腎組織中，AMPK磷酸化明顯下調(diào)、m TOR磷酸化明顯上調(diào)（P<0.01）。與模型組比較，金匱腎氣湯組和依那普利組大鼠梗阻腎組織中，AMPK磷酸化明顯上調(diào)、mTOR磷酸化明顯下調(diào)（P<0.05）。結果表明，金匱腎氣湯和依那普利均可能通過調(diào)節(jié)AMPK-mTOR信號通路促進自噬，從而保護腎組織損傷和抗纖維化，兩者差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05）。圖4 金匱腎氣湯對單側輸尿管梗阻大鼠梗阻腎組織p-mTOR/m TOR和p-AMPK/AMPK蛋白表達的影響（±s,n=3)
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