肝癌是全世界最常見的癌癥之一,發(fā)病率較高,常用手術(shù)或癌癥特效藥進(jìn)行治療,費(fèi)用較高,并且會產(chǎn)生副作用。而中藥中的某些成分具有抗癌活性,提取工藝簡單且毒性較低,可以篩選出來作為有效抗肝癌的藥物。大黃素是從中藥何首烏中提取的一種有效藥物,臨床研究中發(fā)現(xiàn)大黃素具有良好的抗癌活性。然而,大黃素介導(dǎo)的抑制HepG2細(xì)胞生長和細(xì)胞毒性的分子機(jī)制尚未完全闡明。本論文選用HepG2細(xì)胞作為受體細(xì)胞,研究大黃素的抗腫瘤作用機(jī)制。首先運(yùn)用MTT方法研究大黃素對HepG2細(xì)胞的增殖情況,我們發(fā)現(xiàn)大黃素可以抑制HepG2細(xì)胞的增殖,而且有明顯地時間、劑量效應(yīng)。之后我們根據(jù)不同時間點(diǎn)的IC5o值,將細(xì)胞分為空白對照組,低劑量、中劑量和高劑量給藥組,最終選擇對細(xì)胞樣品的1HNMR數(shù)據(jù)進(jìn)行正交信號矯正-偏最小二乘法分析(OSC-PLS-DA),并對胞內(nèi)小分子代謝物進(jìn)行相對定量分析。結(jié)果表明大黃素給藥后許多內(nèi)源代謝物含量顯著改變。利用qRT-PCR方法分析與糖酵解相關(guān)基因的變化,我們發(fā)現(xiàn)大黃素可明顯下調(diào)糖酵解相關(guān)的HKⅡ,PKM2和LDHA的基因水平。同時我們用流式細(xì)胞術(shù)分析胞內(nèi)氧化物ROS的含量及細(xì)胞周期與凋亡情況,發(fā)現(xiàn)大黃素可增加胞內(nèi)ROS含量、擾亂細(xì)胞周期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。綜合相關(guān)網(wǎng)絡(luò)分析我們認(rèn)為大黃素可以通過影響HepG2細(xì)胞能量代謝、氨基酸代謝變化以及影響氧化應(yīng)激系統(tǒng)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：南京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 大黃素抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制研究
        1.1.1 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        1.1.2 影響細(xì)胞周期
        1.1.3 抑制腫瘤細(xì)胞遷移
        1.1.4 抑制各種酶的活性
        1.1.5 抑制與腫瘤相關(guān)的血管生成
        1.1.6 與其他抗腫瘤藥物的協(xié)同作用
    1.2 代謝組學(xué)研究進(jìn)展
        1.2.1 代謝組學(xué)簡介
        1.2.2 代謝組學(xué)分析技術(shù)
        1.2.3 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析方法
        1.2.4 細(xì)胞代謝組學(xué)研究進(jìn)展
2 基于核磁共振代謝組學(xué)的大黃素對HepG2細(xì)胞抗癌活性研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 實驗溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        2.2.2 MTT法檢測細(xì)胞活力
        2.2.3 核磁測試樣品處理
1H NMR測試'>        2.2.4 ¹H NMR測試
1H NMR數(shù)據(jù)預(yù)處理'>        2.2.5 ¹H NMR數(shù)據(jù)預(yù)處理
        2.2.6 代謝物指認(rèn)
        2.2.7 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.2.8 代謝物相關(guān)網(wǎng)絡(luò)分析
        2.2.9 熒光定量PCR實驗
        2.2.10 胞內(nèi)ROS檢測
        2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 大黃素對HepG2細(xì)胞活力的抑制作用
        2.3.2 代謝物指認(rèn)
        2.3.3 一維氫譜的多元統(tǒng)計學(xué)分析
        2.3.4 大黃素對HepG2細(xì)胞中糖酵解基因的調(diào)控作用
        2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)對HepG2細(xì)胞的門控策略分析
        2.3.6 大黃素引起HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS含量的變化
        2.3.7 大黃素對HepG2細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響
    2.4 結(jié)果討論
        2.4.1 能量代謝
        2.4.2 氨基酸代謝
        2.4.3 氧化應(yīng)激
    2.5 本章小結(jié)
    2.6 總結(jié)與展望
致謝
參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2854387