【目的】探討丹皮酚對卵巢癌細胞凋亡的影響及其機制。【方法】用不同劑量(0、1、2、3、4、5、6、7、8 mmol/L)丹皮酚處理人正常卵巢表面上皮細胞HOSEpiC和人類卵巢癌細胞SKOV3。應用細胞計數試劑盒8(CCK8)測定丹皮酚對HOSEpiC和SKOV3細胞的毒副作用,選擇低劑量丹皮酚(1、2、5 mmol/L)進行后續(xù)實驗。用丹皮酚(1、2、5 mmol/L)處理SKOV3細胞,溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法觀察SKOV3細胞的增殖能力,蛋白免疫印跡(Western Blot)法檢測SKOV3細胞Ki67、增殖細胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax、葡萄糖調控蛋白78(GRP78)、CCAAT增強子結合蛋白(C/EBP)同源(CHOP)、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、細胞色素c(Cyto-c)、細胞凋亡誘導因子(AIF)、細胞色素c氧化酶4(COX IV)、cleaved Caspase-9的表達,流式細胞術檢測細胞SKOV3凋亡和Ca2+水平。【結果】丹皮酚(2、5 mmol/L)對正常細胞無害,可劑量依賴性地降低SKOV3細胞存活率。丹皮酚(2、5 mmol/L)抑制SKOV3細胞增殖,促進SKOV3細胞凋亡。與空白對照組比較,丹皮酚(2、5 mmol/L)均升高內質網應激相關的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表達水平及Ca~(2+)含量(均P 0.05)。與空白對照組比較,丹皮酚2、5 mmol/L均降低線粒體損傷相關的凋亡通路Cyto-c、AIF(線粒體內)水平,升高Cyto-c、AIF(胞質)的表達水平,升高cleaved Caspase-9表達水平,下調Bcl-2及上調Bax表達水平(均P 0.05),且呈劑量依賴性。【結論】丹皮酚劑量依賴性地調控SKOV3細胞中內質網應激和線粒體損傷相關的凋亡通路蛋白,可促進卵巢癌細胞凋亡。
【部分圖文】：

圖1結果顯示：高劑量（6～8 mmol/L）丹皮酚處理后，HOSEpi C細胞存活率劑量依賴性地下降（P<0.05）。低劑量（2～5 mmol/L）丹皮酚處理后，SKOV3細胞存活率劑量依賴性地下降（P<0.05）。表明丹皮酚2～5 mmol/L對正常細胞無毒性，且劑量依賴性地抑制SKOV3細胞的存活，因此選擇丹皮酚1～5 mmol/L進行后續(xù)實驗。2.2 丹皮酚抑制SKOV3細胞增殖

本研究進一步觀察丹皮酚促進SKOV3細胞凋亡潛在的分子機制。Western Blot法檢測內質網應激相關的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表達的結果顯示：與空白對照組比較，丹皮酚1、2、5 mmol/L均升高GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3的蛋白表達水平（P<0.05），其中丹皮酚2、5 mmol/L的升高效果有統計學意義（P<0.05），且呈劑量依賴性。進一步用流式細胞術檢測細胞內Ca2+含量，結果顯示：與空白對照組比較，丹皮酚1、2、5 mmol/L均升高Ca2+含量（P<0.05），其中丹皮酚2、5 mmol/L的升高效果有統計學意義（P<0.05），且呈劑量依賴性。具體結果見圖4。表明丹皮酚可通過促進Ca2+從內質網釋放到細胞質中激活內質網應激相關的凋亡通路，促進SKOV3細胞凋亡。圖3 丹皮酚促進SKOV3細胞凋亡

丹皮酚促進SKOV3細胞凋亡
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