目的:通過體外實驗研究小青龍湯對肺癌H292細胞活性及分泌MUC5AC的影響,探討小青龍湯作用的分子機制并為其臨床應用提供理論依據(jù)。方法:采用MTT法檢測不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)對人肺癌H292細胞活性的抑制作用;倒置顯微鏡觀察不同劑量小青龍湯對H292細胞產(chǎn)生的形態(tài)學影響;ELISA法檢測IL-1β誘導的H292細胞MUC5AC分泌情況,根據(jù)結果建立體外炎癥模型,并檢測不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL)對炎癥模型細胞分泌MUC5AC、IL-8、TNF-α的影響;Western Blot法檢測小青龍湯對炎癥模型細胞NF-κB信號通路IκB、P65蛋白表達的影響。結果:1 MTT法檢測結果顯示,與空白對照組相比,不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292細胞24h、48h后,OD值均有降低(P0.01)。隨著給藥濃度的增加,細胞抑制率增加,在同一時間里細胞抑制率有劑量依賴性。2不同濃度小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292細胞24h、48h后,在倒置顯微鏡下可以觀察到H292細胞發(fā)生了不同程度的變小、變圓,細胞間隙增大,細胞碎片增多等改變,1000μg/mL濃度組的改變最為明顯。3 ELISA結果顯示使用IL-1β作為刺激劑,當IL-1β濃度為5ng/mL,作用時間為24h時,H292細胞分泌到胞外的MUC5AC含量與對照組相比有差異(P0.05),并且此時由細胞分泌到胞外的MUC5AC含量占細胞總產(chǎn)生量(胞內(nèi)+胞外)的百分比最高,可作為炎癥模型用于后續(xù)實驗。在檢測細胞上清MUC5AC、IL-8、TNF-α的表達中,與模型組相比,抑制劑組、小青龍湯高劑量組(1000μg/mL)和小青龍湯低劑量組(500μg/mL)均有降低(P0.05)。4 Western Blot結果顯示,與空白對照組比較,模型組H292細胞中NF-κB通路相關蛋白IκB的表達水平下降,P65的表達升高(P0.05)。與模型組相比,抑制劑組、小青龍湯高劑量組(1000μg/mL)和小青龍湯低劑量組(500μg/mL)細胞中蛋白IκB的表達均有不同程度的升高(P0.05);P65的蛋白表達有不同程度的降低(P0.05)。結論:1小青龍湯可以抑制肺癌H292細胞活性,并具有劑量依賴性。2小青龍湯可以降低炎癥狀態(tài)下肺癌H292細胞分泌的MUC5AC表達,同時減少炎癥細胞因子IL-8、TNF-α的釋放,減輕炎癥反應。3小青龍湯調控MUC5AC表達及炎癥細胞因子IL-8、TNF-α分泌與NF-κB信號通路相關。
【學位單位】：河南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

controlmodelAB C050100150200**#*##*圖 7.各 藥 物組 對 H292 細 胞 分 泌 TNF-α含 量 的影 響 制 劑組 ； B.小 青 龍湯 高 劑 量 組； C.小 青 龍湯 低 劑 IL-1β誘導的 H292 細胞 IκB、P65 蛋白表達 結果見圖 8。mL/mL
【參考文獻】

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本文編號：2851685