目的:探索不同劑量黃芩素對單側輸尿管結扎誘導的大鼠腎腎間質纖維化病程的干預作用及其可能的作用機制,并為黃芩素治療和逆轉腎間質纖維化的臨床應用提供依據(jù)。方法:1.模型建立:選取30只健康的Wistar大鼠,雌雄各15只。適應性喂養(yǎng)1周后,稱取體重,隨機分為假手術組(n=12)、手術組(n=18)造模。采用單側輸尿管結扎術制備腎間質纖維化模型。手術組于術后第3天、7天、10天各取6只處死,假手術組大鼠于對應相同時間節(jié)點每次取4只處死。摘取梗阻側腎臟,行HE染色,觀察腎臟病理改變,記錄造模成功時間節(jié)點;2.藥物干預:依據(jù)造模結果,選擇造模成功時間節(jié)點作為藥物干預結束時間。選取40健康的Wistar大鼠,雌雄各20只。適應性喂養(yǎng)1周后,隨機分為兩組,分別為假手術組(n=10)和手術組(n=30)進行造模。造模成功后,將手術組隨機分為3組,分別為模型組、黃芩素低劑量組、黃芩素高劑量組,每組各10只。黃芩素低劑量組給以2%黃芩素溶液50mg/kg/d,黃芩素高劑量組給以2%黃芩素溶液100mg/kg/d,每日灌胃1次,至造模成功時間節(jié)點;模型組和假手術組則每日給予50mg/kg生理鹽水灌胃,灌胃時間相同。實驗終末記錄大鼠體重變化,收集血清,并留取腎臟組織,記錄其重量變化,檢測血肌酐、尿素氮、β微球蛋白(β2-MG)和視黃醇結合蛋白(RBP4)、腎臟組織病理損傷,腎小管及間質膠原纖維面積變化,免疫組化法檢測平滑肌結合蛋白(α-SMA)表達情況,蛋白免疫印跡法檢測內質網(wǎng)應激相關蛋白CHOP、caspase-3變化。結果:1.各組大鼠腎臟病理改變隨造模時間延長日益加重,術后第3天出現(xiàn)腎小管擴張、腎小管上皮細胞脫落和壞死;第7天出現(xiàn)腎間質組織增多、伴單核細胞浸潤;第10天出現(xiàn)較明顯腎小管損害和腎間質纖維化改變。提示第10天可作為造模時間節(jié)點;2.黃芩素低劑量組、高劑量組與模型組比較大鼠體重增加(P0.01),黃芩素高劑量組與低劑量組比較,體重增加更為明顯,兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);腎臟系數(shù):黃芩素高劑量組與模型組相比腎臟系數(shù)降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);黃芩素低劑量組、高劑量組尿素氮水平與模型組相比下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);黃芩素低劑量組、高劑量組血清β2-MG和RBP4與模型組比較含量減少(P0.05),高劑量組與低劑量組比較,下降更為明顯,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);HE染色顯示:黃芩素低劑量組、高劑量組與模型組比較,腎小管上皮細胞變性、腎間質水腫、炎癥細胞浸潤減輕;Masson染色顯示:與模型組比較,黃芩素低劑量組、高劑量組,膠原纖維沉積面積減少(P0.01);免疫組化顯示:黃芩素低劑量組、高劑量組α-SMA陽性表達面積與模型組相比有所減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);蛋白免疫印跡顯示:黃芩素低劑量組、高劑量組與模型組相比,CHOP、caspase3表達量有下降(P0.01),黃芩素高劑量組與低劑量組比較,CHOP、caspase3表達量下降更為明顯,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。結論:(1)黃芩素可有效干預輸尿管結扎造成的腎小管和間質損傷,保護腎功能;(2)黃芩素可延緩腎間質纖維化進程,這可能與其對內質網(wǎng)應激、細胞凋亡的抑制作用有關。
【學位單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

造模時間的延長情況而加重。假手術組腎臟顏色暗紅有光澤，被膜光滑，縱行剖開后，解剖結構分布如常，模型組腎臟與梗阻側對比，體積不同程度增大，被膜菲薄，易于撕裂，剝開后有黃色液體流出，氣味腥臭，腎實質萎縮變薄。見圖1-1。注:圖 A 假手術組，圖 B 3d 組，圖 C 7d 組，圖 D 10d 組。各圖左側為梗阻側腎臟，右側為正常側腎臟。圖 1-1 腎臟肉眼大體觀察病理改變：假手術組腎臟未發(fā)生明顯病理改變，手術組中 3d 組出現(xiàn)部分腎小管擴張、腎小管上皮細胞脫落和壞死；7d 組腎間質擴張更加明顯、伴單核細胞浸潤；10d 組出現(xiàn)腎小管排列紊亂、腫脹變形，腎間質擴張，淋巴細胞、單核

注:圖 A 假手術組，圖 B 3d 組，圖 C 7d 組，圖 D 10d 組。圖 1-2 造模后大鼠腎臟 HE 染色（×400）3.2 藥物干預后大鼠一般狀況及腎組織大體肉眼觀藥物干預期間假手術組和治療組大鼠未發(fā)生死亡，模型組死亡 2 只。假手與模型組大鼠一般情況、腎組織大體肉眼觀如 3.1 所描述。黃芩素治療組般狀況有所改善，但精神狀態(tài)一般，反應較遲鈍。黃芩素治療組腎體積較小，其他無明顯區(qū)別，兩治療組之間一般狀況無明顯差異。3.3 藥物干預后大鼠體重變化及腎臟系數(shù)變化大鼠藥物干預后體重變化：黃芩素低劑量組、高劑量組、模型組與假手術，體重增加較緩慢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05 或 P＜0.01），黃芩素組、高劑量組與模型組相比，體重增加較多，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.0素高劑量組與低劑量組相比，體重增加更為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（；腎臟系數(shù)：黃芩素低劑量組、模型組與假手術組相比，腎臟系數(shù)提

注:圖 A 假手術組，圖 B 模型組，圖 C 低劑量組，圖 D 高劑量組。圖 1-3 大鼠腎臟 HE 染色（×400）表 1-4 各組大鼠腎間質纖維化面積（x±ｓ）n 腎間質纖維化面積(%)組 10 0.108±0.016 8 0.291±0.022*組 10 0.192±0.018*#組 10 0.094±0.023#+與假手術組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01；與低劑量組比較，+P＜0
【參考文獻】

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本文編號：2847872