目的:本研究擬于在慢性心衰大鼠模型上應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫組化、熒光定量PCR、蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)等方法,研究強(qiáng)心活力方是否通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路減輕心肌重構(gòu)機(jī)制,以論證強(qiáng)心活力方可以抑制心肌細(xì)胞凋亡和心肌纖維化,探索強(qiáng)心活力方治療慢性心力衰竭的機(jī)制。本課題的研究結(jié)果將為開(kāi)發(fā)國(guó)家中藥新藥尋找新的作用靶點(diǎn)、奠定理論基礎(chǔ),進(jìn)而對(duì)慢性心力衰竭的防治做出更多貢獻(xiàn)。方法:(1)冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎法制備大鼠慢性心力衰竭模型,按體重隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、參附對(duì)照組及強(qiáng)心活力方高、中、低劑量組。(2)右側(cè)頸動(dòng)脈插管檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)變化,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠血清腦鈉肽含量。(3)通過(guò)慢性心衰大鼠心肌組織病理切片蘇木素-伊紅染色、透射電鏡及馬松(Masson染色)觀察病變大鼠心肌組織和心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及心肌纖維化程度。(4)蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)心肌組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、活化蛋白激酶1、磷酸化的p38的蛋白表達(dá),熒光定量PCR檢測(cè)大鼠心肌組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、活化蛋白激酶1、p38蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)對(duì)血流動(dòng)力學(xué)的影響:與模型組相比,各治療組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)均有不同程度的改善,其中高劑量組改善最為明顯,有顯著性差異(P0.01)。(2)對(duì)血清腦納肽的影響:與模型組比較,各治療組血清BNP含量顯著降低,高劑量組降低最為明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)顯微鏡下觀察蘇木素-伊紅染色和馬松Masson染色病理切片顯示模型組較正常組、假手術(shù)組差異明顯,強(qiáng)心活力方高劑量組改善心肌結(jié)構(gòu),細(xì)胞形態(tài),抑制心肌纖維化方面效果突出。(4)對(duì)Bax、caspase-3及Bc1-2表達(dá)的影響:與模型對(duì)照組比較,各治療組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少,Bax、Caspase3蛋白表達(dá)明顯下降,Bc1-2明顯升高。(5)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGFβ 1)、活化蛋白激酶1(TAK1)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38)表達(dá)的影響:本實(shí)驗(yàn)研究顯示與正常組、假手術(shù)組比較,心衰模型組大鼠心肌組織中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、活化蛋白激酶1、p38絲裂原活化蛋白激酶均出現(xiàn)異常的高表達(dá)狀態(tài),都有顯著性差異。與模型組比較,強(qiáng)心活力方高、中、低劑量組及參附對(duì)照組轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 1、活化蛋白激酶1、p38絲裂原活化蛋白激酶表達(dá)有顯著性差異,均有抑制作用,尤其高劑量組對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、p38絲裂原活化蛋白激酶表達(dá)抑制更為明顯,治療后也可接近正常表達(dá)水平。但對(duì)活化蛋白激酶1表達(dá)影響不明顯,原因有待進(jìn)一步研究。結(jié)論:強(qiáng)心活力方標(biāo)本兼顧,溫陽(yáng)益氣、活血利水,組方精良,可明顯改善慢性心力衰竭大鼠的心功能指標(biāo)和心肌組織形態(tài);強(qiáng)心活力方能有效抑制促細(xì)胞凋亡蛋白Bax及caspase-3表達(dá),增加抗凋亡蛋白Bc1-2表達(dá),從而減輕心肌細(xì)胞凋亡;強(qiáng)心活力方抑制心肌重構(gòu)的作用機(jī)制可能與下調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 1的表達(dá),進(jìn)而抑制p38MAPK信號(hào)通路有關(guān);實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持TGFβ 1/p38MAPK通路,但沒(méi)有支持TGFβ 1-TAK1-p38MAPK通路,可能是由于P38除了受活化蛋白激酶1激活也受其他MAPKKK激活,在TGFβ1、p38之間通過(guò)什么激活需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)論證�？傊�,強(qiáng)心活力方改善心肌重構(gòu),有效治療慢性心力衰竭,對(duì)此病的防治意義重大,建議臨床選用此方。
【學(xué)位單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

圖３－１總ＲＮＡ瓊脂糖電泳檢測(cè)結(jié)果??３．２目的基因引物特異性檢測(cè)??圖３－２為內(nèi)參基因Ｔｕｂｕｌｉｎ、ｐ３８、ＴＡＫｌ與ＴＧＦＰ１實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ溶解曲線，Ｘ??軸表示解鏈溫度，Ｙ軸表示熒光強(qiáng)度；結(jié)果顯示，溶解曲線峰形單一，證明引物特異性??高，符合實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ試驗(yàn)要求，結(jié)果可信。??Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?＼＾ｔ?Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?ＫＴ??００?￣￣．?????????１?—１?ｒ—ｒｎ?００?＿，?????，￣—??，?—???８０?？?８０?－?：???????？??７０?■?■??－?????７０?－?／?????????ｏｏ?■?－?■?■?？?？?－?■?ｅｏ?■??５?？〇?？?－?５．?５０?????－??ａ?４ｌｉ?■?－?－?（ｅ?４〇?－?■?．??３０??；?????■?■?■?３０?■?－???＇？?．??２０?？?？??????????２０?■?？??????

．１．９７?２．１５??低?２３１〇－??Ｌ＿９６?２．?３６??｜籠疆１?１?１纛二＝??圖３－１總ＲＮＡ瓊脂糖電泳檢測(cè)結(jié)果??３．２目的基因引物特異性檢測(cè)??圖３－２為內(nèi)參基因Ｔｕｂｕｌｉｎ、ｐ３８、ＴＡＫｌ與ＴＧＦＰ１實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ溶解曲線，Ｘ??軸表示解鏈溫度，Ｙ軸表示熒光強(qiáng)度；結(jié)果顯示，溶解曲線峰形單一，證明引物特異性??高，符合實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ試驗(yàn)要求，結(jié)果可信。??Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?＼＾ｔ?Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?ＫＴ??００?￣￣．?????????１?—１?ｒ—ｒｎ?００?＿，?????，￣—??，?—???

．１．９７?２．１５??低?２３１〇－??Ｌ＿９６?２．?３６??｜籠疆１?１?１纛二＝??圖３－１總ＲＮＡ瓊脂糖電泳檢測(cè)結(jié)果??３．２目的基因引物特異性檢測(cè)??圖３－２為內(nèi)參基因Ｔｕｂｕｌｉｎ、ｐ３８、ＴＡＫｌ與ＴＧＦＰ１實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ溶解曲線，Ｘ??軸表示解鏈溫度，Ｙ軸表示熒光強(qiáng)度；結(jié)果顯示，溶解曲線峰形單一，證明引物特異性??高，符合實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ試驗(yàn)要求，結(jié)果可信。??Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?＼＾ｔ?Ｍｅｌｔ?Ｐｅａｋ?ＫＴ??００?￣￣．?????????１?—１?ｒ—ｒｎ?００?＿，?????，￣—??，?—???
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉智;王健全;王星云;劉暢;申麗雪;徐慧穎;張大方;;參附湯抗大鼠心肌缺血作用與apelin表達(dá)的相關(guān)性研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2015年12期

2 陶琳;徐朱華;王哲;楊毅;;番茄紅素對(duì)心力衰竭大鼠心臟腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性的調(diào)節(jié)作用[J];嶺南心血管病雜志;2015年05期

3 柴連海;王麗麗;陳文生;;黃芪及其活性成分黃芪多糖對(duì)心衰模型小鼠同型半胱氨酸、核因子-κB和D-二聚體水平的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年17期

4 張曉娟;李保;王敬萍;;左西孟旦、米力農(nóng)和多巴酚丁胺治療急性心力衰竭的對(duì)比研究[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2015年05期

5 于瑞;王幼平;崔琳;李彬;謝世陽(yáng);高原;王新陸;朱明軍;;心肌纖維化的發(fā)病機(jī)制及其研究進(jìn)展[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2015年13期

6 韓凌;;交感神經(jīng)系統(tǒng)在心力衰竭中的作用[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2015年04期

7 華新宇;王曉蘭;康美清;楊慶堂;;三七總皂苷對(duì)慢性心力衰竭患者心功能及血漿細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的影響[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2014年12期

8 張平;張?jiān)賯?邵靚;;TGF-β1、CTGF對(duì)慢性心衰心肌纖維化進(jìn)展的臨床意義[J];昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年11期

9 陳金秋;邰長(zhǎng)利;;真武湯合葶藶大棗瀉肺湯輔助治療急性左心衰(陽(yáng)虛水泛證)的臨床研究及對(duì)生活質(zhì)量的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2014年31期

10 龔享文;楊欽河;閆海震;張玉佩;梁蔭基;劉益臻;張金文;林春梅;李媛媛;;疏肝健脾方藥含藥血清對(duì)LPS刺激下大鼠肝細(xì)胞炎癥損傷及TLR4/p38MAPK信號(hào)通路影響的研究[J];中國(guó)中藥雜志;2014年20期

本文編號(hào)：2845284