棗為我國主要果樹產(chǎn)業(yè)之一,我國南方地區(qū)特別是湖南省棗資源十分豐富,生產(chǎn)發(fā)展迅速,棗果的綜合利用是棗產(chǎn)業(yè)持續(xù)高效發(fā)展的重要保證。為促進(jìn)棗功能成分的研究利用及我國南方棗果資源的開發(fā)利用,本文以湖南衡陽地區(qū)主要棗品種果實(shí)為試材,以棗黃酮及棗多糖含量為主要指標(biāo),在對不同棗品種黃酮、多糖含量分析的研究基礎(chǔ)上,選取小米棗為試驗(yàn)材料,進(jìn)行了棗黃酮的提取、分離純化,棗黃酮、多糖及其復(fù)配物的體外抗氧化活性及其對Hacat細(xì)胞的抗氧化活性研究,主要研究結(jié)果如下:(1)測定了湖南衡陽地區(qū)7個棗品種果實(shí)中黃酮的含量,篩選出了黃酮含量高的棗品種。以雞蛋棗、糖棗、藥棗、小米棗、梨棗、酸棗等棗品種為試材,通過對不同棗品種果實(shí)黃酮含量的分析測定,發(fā)現(xiàn)供試品種的黃酮含量均值為0.493 mg/g,其中以小米棗、藥棗的黃酮含量最高,分別為:0.606 mg/g、0.579 mg/g;梨棗、子代糖棗、母本糖棗的含量次之,分別為:0.522 mg/g、0.495 mg/g、0.466 mg/g;而酸棗和雞蛋棗黃酮含量最低,僅為0.439 mg/g、0.344 mg/g。不同品種棗果實(shí)黃酮含量差異較大。(2)進(jìn)行了小米棗黃酮的提取工藝研究。采用單因素實(shí)驗(yàn)與正交試驗(yàn)相結(jié)合得到了黃酮最佳的提取工藝參數(shù)。并在此最佳提取工藝條件下對小米棗黃酮、多糖進(jìn)行了復(fù)合提取。結(jié)果表明,影響黃酮含量的4個主要單因素分別為超聲功率、乙醇濃度、料液比、提取時間,正交實(shí)驗(yàn)得到小米棗黃酮的最佳超聲提取工藝為:料液比1:16、乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、提取時間20 min、超聲功率700 W;采用醇沉前加入三氯乙酸(TCA)脫蛋白的方法能有效去除混合液中的蛋白質(zhì),當(dāng)加入TCA量為1.0%時,其對蛋白質(zhì)的脫除效果最佳,此時蛋白質(zhì)的脫除率為74.67%,同時能最大程度上保證多糖的保留;多糖經(jīng)活性炭脫色及AB-8樹脂除雜后的純度可達(dá)76.84%。(3)進(jìn)行了小米棗黃酮的分離純化研究。研究了XDA-1、X-5、NKA-II、D201、AB-8共五種大孔吸附樹脂對黃酮的純化效果,并在此靜態(tài)試驗(yàn)基礎(chǔ)上篩選出三種樹脂進(jìn)行泄露曲線的研究。結(jié)果表明,不同樹脂對黃酮的靜態(tài)吸附能力大小依次為XDA-1X-5AB-8NKA-IID201,5種樹脂對黃酮的靜態(tài)解析能力大小依次為X-5NKA-IIAB-8XDA-1D201,在此基礎(chǔ)上初步篩選X-5、NKA-II及XDA-1這3種樹脂進(jìn)行進(jìn)一步動態(tài)吸附與解析試驗(yàn)。結(jié)果表明X-5樹脂對小米棗黃酮純化效果最好,其動態(tài)吸附率與解析率分別達(dá)79.50%、99.53%,它對小米棗黃酮的適宜純化條件為:上樣液黃酮濃度為0.263 mg/mL、pH值為5.0、流速為2 BV/h;洗脫劑乙醇濃度為70%,洗脫液PH值為6.0。此條件下分離純化得到的黃酮純度為68.12%。(4)以還原力、對超氧陰離子自由基、DPPH自由基、OH自由基的清除力作為評價指標(biāo),比較了三個品種棗中黃酮、多糖的含量及其體外抗氧化性;并用超氧陰離子自由基、DPPH自由基清除力實(shí)驗(yàn)分別與加和法、等輻射分析法相結(jié)合研究了小米棗黃酮、多糖復(fù)配物的抗氧化協(xié)同作用類型及其強(qiáng)弱。結(jié)果表明,小米棗體外抗氧化性能明顯強(qiáng)于糖棗與藥棗,說明三個品種中以小米棗的開發(fā)利用價值最高;不同品種棗抗氧化性的強(qiáng)弱與黃酮及多糖含量均呈正相關(guān);三個品種棗黃酮及多糖的還原力、清除羥基自由基、超氧陰離子自由基及DPPH自由基的能力在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)均與濃度呈正相關(guān),且均低于VC的抗氧化性;同一品種中棗黃酮的抗氧化性明顯高于棗多糖。小米棗黃酮與多糖復(fù)配后的各種組合IC_(50mix)值均小于IC_(50add)值,且相互作用指數(shù)γ都小于1,證實(shí)兩者間存在協(xié)同抗氧化作用,且此復(fù)配物對超氧陰離子自由基的協(xié)同作用強(qiáng)于DPPH自由基,復(fù)配物均在1:1配比時發(fā)揮出最佳抗氧化協(xié)同的作用。(5)以HaCat細(xì)胞為載體,研究了復(fù)配物、對照物(VC)對細(xì)胞氧化損傷進(jìn)行預(yù)保護(hù)后的ROS水平及SOD水平的影響。結(jié)果表明,在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),0.3、0.6 mg/mL的小米棗黃酮、多糖復(fù)配物及0.07 mg/mL的VC對Hacat細(xì)胞活性影響較小,在30umol/l的H_2O_2刺激下,細(xì)胞存活率為40%左右,較好造成了細(xì)胞氧化損傷模型;ROS及SOD活性檢測的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,加入H_2O_2后,細(xì)胞內(nèi)的ROS水平明顯升高、SOD水平明顯降低,而加入復(fù)配物及VC后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯降低、SOD水平明顯升高,表明復(fù)配物及VC對H_2O_2造成的氧化損傷均具有顯著預(yù)保護(hù)作用,且小米棗黃酮、多糖復(fù)配物抗氧化作用強(qiáng)于VC,表明小米棗黃酮、多糖的復(fù)配物對HaCat細(xì)胞有較好的抗氧化作用。
【學(xué)位單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

圖 6.5 H2O2模型組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig6. 5 The intracellular mean fluorescence intensity of H2O2model group圖 6.6 空白對照組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig 6.6 The intracellular mean fluorescence intensity of blank control group

52圖 6.6 空白對照組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig 6.6 The intracellular mean fluorescence intensity of blank control group圖 6.7 高濃度復(fù)配物+H2O2組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig6.7 The intracellular mean fluorescence intensity of high concentration compound and H2O2group

圖 6.5 H2O2模型組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig6. 5 The intracellular mean fluorescence intensity of H2O2model group圖 6.6 空白對照組的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度Fig 6.6 The intracellular mean fluorescence intensity of blank control group
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本文編號：2838422