目的:補(bǔ)肺消積顆粒是榮遠(yuǎn)明教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)治療肺癌的基本方,治療肺癌效果良好。本研究通過建立肺癌氣陰兩虛證模型,經(jīng)補(bǔ)肺消積顆粒干預(yù)后,檢測炎癥相關(guān)指標(biāo)及瘤體大小,評價補(bǔ)肺消積顆粒的消炎和抑瘤作用。并通過檢測NLRP3炎癥小體的表達(dá),研究補(bǔ)肺消積顆粒消炎抑瘤的作用機(jī)制,從而為中醫(yī)藥防治肺癌提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)一:選取5-6周齡BALB/cA-nu雌鼠(體重18-22g)30只,隨機(jī)分為空白對照組,氣陰兩虛對照組(模型組),陽性對照組(MCC950溶液),低中高三種濃度中藥組,共6組,每組5只。除空白對照組外,其余5組裸鼠根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)用溫?zé)嶂兴幑辔讣印芭倩熝苯怅巸商撃Ｐ?再將非小細(xì)胞系肺癌細(xì)胞A549接種到裸鼠右后臀部,待成瘤后定期灌服生理鹽水、陽性藥稀釋液及補(bǔ)肺消積顆粒稀釋液,觀察并記錄裸鼠一般生活狀況,腫瘤體積,抑瘤率、自主活動。實(shí)驗(yàn)?zāi)┘粗委熀蟮?8天,統(tǒng)一以眼底靜脈取血并頸椎脫臼處死,取血清行ELISA法檢測IL-1β、IL-18、丙二醛(MDA),剝離皮下腫瘤結(jié)節(jié)用于免疫組化檢測NLRP3,用Western Blot法檢測MDA、IL-1β、IL-18、NLRP3。實(shí)驗(yàn)二:選取5-6周齡BALB/cA-nu雌鼠(體重18-22g)15只,隨機(jī)分為空白對照組,氣陰兩虛對照組,脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)+氣陰兩虛對照組(簡稱LA組,LPS聯(lián)合ATP具有促進(jìn)炎癥的作用)共3組,每組5只。除空白對照組僅接種肺癌A549細(xì)胞,其余2組裸鼠進(jìn)行肺癌氣陰兩虛證造模,待成瘤后定期灌服生理鹽水和(LPS+ATP)稀釋液。其余方法同實(shí)驗(yàn)一。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:對比觀察氣陰兩虛組和空白組裸鼠的生存狀況,記錄裸鼠的自主活動、腫瘤體積、抑瘤率,結(jié)果顯示該裸鼠模型的癥狀與肺癌氣陰兩虛證的病癥模型相吻合;同時利用實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果顯示,ELISA和Western Blot結(jié)果均顯示氣陰兩虛組中MDA含量顯著高于空白組(P0.05),而IL-1β、IL-18(作為IL-1的活性成員)這兩個指標(biāo)實(shí)驗(yàn)中的含量均高于空白組,且多數(shù)結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)有意義(P0.05)。通過與氣陰兩虛組(模型組)比較,發(fā)現(xiàn)高濃度中藥組裸鼠一般情況有所好轉(zhuǎn),活動能力增強(qiáng),瘤體增大不顯著。同時免疫組化也提示高濃度中藥組更能有效降低NLRP3陽性指數(shù),血清和蛋白結(jié)果均顯示高濃度中藥組與模型組相比在抑制MDA、IL-1β和IL-18等氣陰兩虛評價因子及NLRP3炎癥小體方面有較好的作用(P0.05)。實(shí)驗(yàn)二:與氣陰兩虛組比較,LA組裸鼠的站立次數(shù)和活動步數(shù)均有所下降;同時LA組血清和蛋白中IL-1β和IL-18的表達(dá)均高于氣陰兩虛組(P0.05),血清中MDA含量也有顯著上升(P0.05),免疫組化結(jié)果也提示LA組中NLRP3陽性表達(dá)指數(shù)高于氣陰兩虛組(P0.05),而蛋白表達(dá)雖有升高,但差異不明顯(P0.05)。結(jié)論:1、補(bǔ)肺消積顆粒能有效改善肺癌氣陰兩虛證裸鼠的一般生活狀態(tài)和腫瘤生長情況,降低氣陰兩虛評價因子MDA、IL-1β、IL-18以及NLRP3炎癥小體的表達(dá)。2、NLRP3炎癥小體與肺癌氣陰兩虛證密切相關(guān),NLRP3炎癥小體在一定程度上能夠促進(jìn)肺癌氣陰兩虛證的進(jìn)展。3、具有益氣養(yǎng)陰功效的驗(yàn)方補(bǔ)肺消積顆�？赡芡ㄟ^下調(diào)肺癌氣陰兩虛證裸鼠中NLRP3炎癥小體的表達(dá),進(jìn)而起到消炎抑瘤的作用。
【學(xué)位單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

小鼠腫瘤組織

注：C：空白對照組；Q：氣陰兩虛對照組（模型組）；Y：陽性對照組；L：低濃度中藥組；M：中濃度中藥組；H：高濃度中藥組圖 4 NLRP3 免疫組化（×200）圖 5 各組 NLRP3 免疫組化陽性指數(shù)比較注：C：空白對照組；Q：氣陰兩虛對照組（模型組）；Y：陽性對照組；L：低濃度中藥組；M：中濃度中藥組；H：高濃度中藥組3.5 各組裸鼠血清 ELISA 法檢測 MDA、IL-1β、IL-18 的結(jié)果0.001.002.003.00C Q Y L M H免疫組化陽性指數(shù)*****

計算腫瘤體積，V(cm3)= ab2/2(a 為瘤體最長徑，b 為最短徑)。實(shí)驗(yàn)?zāi)┘粗委熀蟮?28 天，統(tǒng)一以眼底靜脈取血并頸椎脫臼處死，剝離皮下腫瘤結(jié)節(jié)稱瘤重。腫瘤組織見圖 9，圖 10；統(tǒng)計分析見表 4。結(jié)果：腫瘤體積方面，LA 組比氣陰兩虛組雖有增大，但差異不明顯（P＞0.05）；瘤重方面，LA 組與氣陰兩虛組比較，瘤重雖有增重，但不明顯（P＞0.05）。表 4 各實(shí)驗(yàn)組瘤體和瘤重變化情況(x±s)組別 腫瘤體積（cm3） 瘤重（g）空白對照組 1305.36±156.30 1420.08±101.99氣陰兩虛對照組 1676.79±227.43 1665.80±189.25LA 對照組 1862.27±316.85 1880.11±315.79注：與空白對照組比較，aP＜0.05；與氣兩虛對照組比較，bP＜0.05；

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