目的研究馬錢子堿對三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞裸鼠皮下移植瘤生長的影響及其可能機制的探討。方法將處于對數(shù)生長期的MDA-MB-231注射到裸鼠皮下,構(gòu)建三陰性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,并將造模成功的裸鼠隨機分為馬錢子堿低、中、高劑量組(15、30、60 mg/kg),陽性對照組(紫杉醇5 mg/kg)和陰性對照組(1%DMSO)。其中馬錢子堿組和陰性對照組采用灌胃給藥,每天一次;紫杉醇組采用腹腔注射,兩天一次,共給藥4周。期間每周兩次對裸鼠體重、移植瘤長、短徑進行測量,并按公式計算移植瘤的體積。治療結(jié)束后隔天采用脫頸處死法處死裸鼠,剝離移植瘤。觀察馬錢子堿對裸鼠皮下移植瘤的生長影響,并計算各組裸鼠移植瘤大小、重量及腫瘤生長抑制率,細胞增殖相關(guān)核抗原(Ki-67)染色評估腫瘤細胞增殖情況;凋亡原位末端標記法(TUNEL實驗)及凋亡蛋白Caspase-3免疫組化染色來評估馬錢子堿對裸鼠移植瘤細胞凋亡的影響。體外培養(yǎng)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞,并用不同濃度的馬錢子堿(25、50、100、200、400μg/m L)處理MDA-MB-231細胞48 h,收取細胞中的總蛋白,用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表達水平,觀察不同濃度的馬錢子堿處理三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞后,對凋亡蛋白Caspase-3表達的影響。結(jié)果在體內(nèi)實驗中,皮下注射乳腺癌MDA-MB-231細胞6周后,共有16只裸鼠造模成功,移植瘤長徑約0.5 cm,其中一只因進食及營養(yǎng)狀況較差,舍棄不用,余下15只裸鼠隨機分為五組,并進行相應(yīng)的治療。治療結(jié)束后裸鼠移植瘤的生長情況顯示:與陰性對照組相比,馬錢子堿中、高劑量組(30、60 mg/kg)及陽性對照組(紫杉醇5 mg/kg)移植瘤體積明顯縮小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,而馬錢子堿低劑量組(15 mg/kg)移植瘤體積未見明顯差別;與陽性對照組相比,陰性對照組及馬錢子堿低劑量組移植瘤體積顯著增大,而馬錢子堿高、中劑量組無明顯區(qū)別。對各組移植瘤標本進行Ki-67染色、TUNEL實驗及Caspase-3免疫組化實驗結(jié)果中提示:與陰性對照組相比,馬錢子堿中、高劑量組(30、60 mg/kg)及陽性對照組(紫杉醇5 mg/kg)在上述實驗中均具有顯著差別,而馬錢子堿低劑量組(15 mg/kg)則無明顯差別。在體外實驗中,蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示:200、400μg/m L濃度的馬錢子堿處理的三陰性乳腺癌細胞(TNBC),其Caspase-3蛋白的表達水平明顯高于其他劑量組及陰性對照組,而其他濃度的馬錢子堿處理的三陰性乳腺癌細胞,Caspase-3蛋白的表達水平未見明顯區(qū)別。結(jié)論馬錢子堿能抑制三陰性乳腺癌裸鼠移植瘤的生長,其機制可能與馬錢子堿誘導(dǎo)三陰性乳腺癌細胞發(fā)生凋亡有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

19圖 1：治療結(jié)束后各組小鼠剝離的移植瘤大體圖片E 依次為：陰性對照組、馬錢子堿 15、30、60mg/kg 組及紫杉ages of transplanted tumors of mice in each group after treatmentnegative control group, brucine 15, 30, 60 mg/kg group and paclita

圖 3 各組移植瘤 Ki-67 免疫組化陽性細胞數(shù)占陰性對照組百分比與陰性對照組相比較：**p<0.01；與紫杉醇組相比：##p<0.01mber of Ki-67 immunohistochemical positive cells in each group accounpercentage of negative control groupd with the negative control group:**p<0.01; compared with the paclitaxe

ining and Ki-67 staining of transplanted tumors of nude mice in eachMagnification × 200: negative control group; B:brucine 15 mg/kg; C: brucine 30 mg/kg;D: brucine 60 mg/kg; E: paclitaxel group圖 2 對各組裸鼠移植瘤進行 HE 染色及 Ki-67 染色 放大倍數(shù)×2：陰性對照組；B：馬錢子堿 15mg/kg；C：馬錢子堿 30mg/kg；D：馬錢子堿 60mg/kg；E：紫杉醇組

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本文編號：2828415