心腦血管疾病仍然是當(dāng)今危害人類健康的頭號殺手,探尋和開發(fā)防治心腦血管疾病安全而有效的藥物是醫(yī)藥工作者迫在眉睫的任務(wù)。中藥復(fù)方是開發(fā)高效創(chuàng)新藥物的源泉,闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)則是其關(guān)鍵環(huán)節(jié)和瓶頸。藥對是中藥復(fù)方的核心組成部分,反映著復(fù)方核心配伍關(guān)系,從藥對角度出發(fā)是研究復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的重要切入口。在前期“良關(guān)系”藥對有效成分群辨識思路的指導(dǎo)下,本論文選擇活血化瘀的經(jīng)典藥對“丹參-降香”為研究對象,以臨床有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控的香丹注射液為研究載體,從藥代動(dòng)力學(xué)角度對丹參-降香藥對在正常及急性血瘀模型大鼠體內(nèi)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行系統(tǒng)研究,旨在為中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。全文共分3章,作者的主要貢獻(xiàn)如下:1.建立了香丹注射液HPLC-Q-TOF/MS和GC/MS分析方法,對香丹注射液中的基礎(chǔ)物質(zhì)進(jìn)行了表征與鑒定,從中鑒定出53個(gè)水溶性成分和9個(gè)揮發(fā)性成分。以上研究為丹參-降香藥對的質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了基礎(chǔ)物質(zhì)的可追溯性,也為丹參-降香藥對體內(nèi)代謝研究奠定了同等條件下方法學(xué)基礎(chǔ)。2.建立了大鼠血漿中丹參酚酸類的HPLC分析方法,并采用該方法和擬定的HPLC-Q-TOF/MS法考察了丹參-降香藥對在正常及急性血瘀大鼠體內(nèi)的代謝輪廓,共鑒定出39個(gè)藥物原型成分(主要為酚酸類)及79個(gè)藥物代謝產(chǎn)物,主要涉及甲基化、硫酸化以及葡萄糖醛酸化等代謝途徑。比較了丹參-降香藥對在正常及急性血瘀大鼠體內(nèi)藥物代謝的差異性,結(jié)果表明,病理因素會(huì)使藥物成分入血增多,消除減慢,作用時(shí)間延長。3.采用擬定的HPLC-Q-TOF/MS分析方法研究了丹參-降香藥對在正常及急性血瘀大鼠心、腦、肝、腎的組織分布,共鑒定出24個(gè)藥物原型成分及76個(gè)藥物代謝產(chǎn)物,主要集中分布于心、肝、腎等器官,其中吸收進(jìn)入心、腦等靶器官和肝組織的物質(zhì)為丹參酚酸類成分(如丹參素、迷迭香酸、丹酚酸A等),主要的代謝形式包括甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化。在急性血瘀大鼠組織中的眾多代謝形式中發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了異丙基化產(chǎn)物,不僅證實(shí)了丹參素異丙酯的存在,還首次發(fā)現(xiàn)了咖啡酸異丙酯。上述研究表明,異丙基化可能為“良關(guān)系”藥對丹參-降香方證對應(yīng)的體內(nèi)重要和特征性代謝通路。4.采用主成分分析法,借助SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析了大鼠給藥香丹注射液后血漿中變化明顯的藥物成分、內(nèi)源性應(yīng)答物、代謝應(yīng)答物之間的相關(guān)性,結(jié)合組織分布的研究結(jié)果,初步確定丹參-降香藥對體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)為迷迭香酸、丹酚酸A、丹參素異丙酯、咖啡酸異丙酯、丹酚酸A的甲基化結(jié)合單葡萄糖醛酸化物、丹酚酸A的二甲基化產(chǎn)物以及丹酚酸A的二甲基化結(jié)合葡萄糖醛酸化產(chǎn)物。5.初步考察了丹參-降香藥對體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)之一丹參素異丙酯的體內(nèi)代謝過程,確定其體內(nèi)代謝產(chǎn)物主要為丹參素及其代謝產(chǎn)物。藥物代謝研究的結(jié)果可為丹參素異丙酯的安全性和有效性評估提供有力支撐。同時(shí)本研究還構(gòu)建了人體尿液中丹參素檢測的HPLC-Q-TOF/MS分析方法學(xué),并對缺氧炎癥條件下病人尿液中的丹參素進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證(見附錄)。
【學(xué)位單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

31圖 2 丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、香草酸、咖啡酸、阿魏酸的質(zhì)譜裂解模式多環(huán)酚酸類化合物多環(huán)酚酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的芳香環(huán)。通過與對照品保留時(shí)間、二級質(zhì)譜信息的比對，初步確定化合物 28，35，36，38 分別為紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 和丹酚酸 A�；衔� 35 在負(fù)離子下呈現(xiàn)出一個(gè)較強(qiáng)的分子離子峰[M H] (359.0770)，其特征性離子為 m/z 197.0441，179.0334，161.0230，表明化合物 35 的分子離子峰分 別 脫 去 了 一 分 子 咖 啡 酰 氧 基 [M H 162(caffeoyl)] ， 一 分 子 咖 啡 酸

32圖 3 迷迭香酸的質(zhì)譜裂解模式與化合物 35 類似，化合物 31 具有一個(gè)明顯的母離子[M H] (417.0839)，其母離子首先丟失一分子 CO2產(chǎn)生 m/z 373.0915([M H CO2] )的碎片離子，該子離子進(jìn)一步分別脫去 176(未知基團(tuán))和一分子丹參素得到子離子 m/z 197.0454[M H CO2 176 (unknown moeity)] 以及 m/z 175.0398[M H CO2 DSS] ，其二級質(zhì)譜信息與先前研究[167]的丹酚酸 D 的二級質(zhì)譜信息一致，因而推斷化合物 31為丹酚酸 D，其裂解途徑如圖 4 所示。

33圖 4 丹酚酸 D 的質(zhì)譜裂解模式化合物 33 和 38 的分子離子峰的質(zhì)荷比均為 m/z 493.11[M H] ，因而是一對同分異構(gòu)體。通過與對照品色譜行為及二級質(zhì)譜信息的比對，確定化合物 38 為丹酚酸 A，其代表性碎片離子 m/z 313.0694[M H CO2 CA] 是母離子通過斷裂一分子咖啡酸而形成，而碎片離子 m/z 295.0602[M H DSS] 是母離子通過斷裂一分子丹參素而形成，丹酚酸 A 的裂解途徑如圖 5 所示。化合物 33 還產(chǎn)生了一個(gè)典型的碎片離子 m/z 277.0503，碎片離子 m/z 277.0503 的出現(xiàn)表明化合物 33中存在一個(gè)五元環(huán)醚的結(jié)構(gòu)，因而碎片離子 m/z 295.0601[M H 198(DSS)] 會(huì)脫

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2825758