失眠是一種常見的睡眠障礙性疾病,對(duì)人們的生活造成了嚴(yán)重的影響,很多中藥治療失眠均有較好的療效,百合地黃湯源于《金匱要略》,是治療失眠的經(jīng)方,但其作用機(jī)制尚不明確,本課題在優(yōu)化百合地黃湯最佳提取工藝的基礎(chǔ)上,研究百合地黃湯治療失眠的作用機(jī)制,并篩選百合地黃湯治療失眠的最佳有效部位。本課題進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):(1)采用正交設(shè)計(jì),以乙醇濃度、溶劑倍量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間為考察因素,每個(gè)因素選取3個(gè)水平,以百合地黃湯中梓醇含量和浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采取綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果表明百合地黃湯的最佳提取工藝為12倍量50%乙醇浸泡90min,提取60min,梓醇含量和浸膏得率較高,且經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),工藝穩(wěn)定可行,可用于后續(xù)研究中。(2)采用腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、地西泮組、百合地黃湯低、中、高劑量組,另設(shè)空白組,連續(xù)給藥7d,采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定行為學(xué)評(píng)分,翻正反射實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)百合地黃湯對(duì)大鼠睡眠時(shí)間的影響;建立大鼠腦部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的HPLC-ECD測(cè)定方法,并采用該法檢測(cè)大鼠皮層、腦干和海馬中DA、5-HIAA、HVA和5-HT的含量。與空白組相比,模型組大鼠體重和曠場(chǎng)得分明顯降低(p0.05),中央格停留時(shí)間、修飾次數(shù)、糞便顆粒數(shù)及睡眠潛伏期等指標(biāo)明顯升高(p0.05),模型組大鼠不同腦區(qū)中DA含量明顯升高,5-HT含量明顯降低(p0.05);與模型組相比,各治療組大鼠的中央格停留時(shí)間、修飾次數(shù)和糞便顆粒數(shù)明顯降低(p0.05),大鼠的睡眠潛伏期縮短,且百合地黃湯組大鼠的睡眠持續(xù)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(p0.05),百合地黃湯組大鼠皮層中DA含量明顯降低(p0.05),地西泮組和百合地黃湯低劑量組大鼠皮層、腦干和海馬中5-HT含量明顯升高(p0.05),百合地黃湯中、高劑量組大鼠腦干和海馬中5-HT含量升高(p0.05);空白組、模型組、地西泮組大鼠皮層中DA含量較高,可以檢出HVA,其余各組均未檢出。結(jié)果表明百合地黃湯可改善失眠模型的大鼠行為學(xué)和睡眠,對(duì)大鼠腦部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)作用可能是其治療失眠的作用機(jī)制。(3)建立大鼠血清中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的LC-MS/MS測(cè)定方法,并采用該法檢測(cè)大鼠血清中Glu和GABA的含量。與空白組相比,模型組大鼠血清中GABA、Glu含量無(wú)明顯變化,Glu和GABA的比值顯著升高(p0.01);與模型組相比較,地西泮組、百合地黃湯中劑量組和百合地黃湯高劑量組大鼠血清中Glu/GABA的比值明顯降低(p0.05)。結(jié)果表明百合地黃湯發(fā)揮治療失眠的作用與調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu的含量密切相關(guān)。(4)百合地黃湯提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取,分離得不同萃取部位,以果蠅失眠模型篩選鎮(zhèn)靜催眠的最佳有效部位,并研究其對(duì)果蠅腦部DA、5-HIAA、HVA和5-HT含量的影響。與空白組相比,模型組果蠅的睡眠時(shí)間顯著縮短(p0.01),果蠅腦部DA含量明顯升高(p0.05),5-HIAA和5-HT的含量明顯降低(p0.05);與模型組相比,百合地黃湯全方組、石油醚部位低劑量組、二氯甲烷部位中劑量組、乙酸乙酯部位中劑量組、水飽和正丁醇部位低劑量組果蠅睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(p0.05),各提取部位組果蠅腦部的DA和HVA含量降低,5-HT和5-HIAA含量升高,二氯甲烷部位對(duì)果蠅睡眠和果蠅腦部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)作用最為明顯。本課題首次以果蠅為模式生物篩選百合地黃湯治療失眠的最佳有效部位,結(jié)果表明百合地黃湯治療失眠的最佳有效部位為二氯甲烷部位,各提取部位對(duì)果蠅腦部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量具有一定的調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285.5
【部分圖文】：

１０卟、１２隊(duì)、１５（＿ｉＬ、１８｜ｉＬ，測(cè)定梓醇的峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Ｙ），對(duì)逡逑照品的質(zhì)量（叩）為橫坐標(biāo)（Ｘ）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Ｙ＝６２１０６８．３１Ｘ－２０４９．６４，逡逑Ｒ２＝０．９９９９，梓醇在０．０３？０．１８丨ｉｇ范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線見

取不同濃度的混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣５邋ｐＬ。以對(duì)照品的質(zhì)量（Ｘ）為橫坐標(biāo)、逡逑峰面積（Ｙ）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，各項(xiàng)線性關(guān)系均良好。結(jié)果見表９，標(biāo)準(zhǔn)曲線見逡逑圖４。逡逑表９線性關(guān)系考察結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋９邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ逡逑成分邐線性范圍／ｎｇ邐線性方程邐Ｒ２值逡逑ＤＡ邐０．１５邋？４．８０邐Ｙ＝７５８５３８Ｘ－４６７２６邐０．９９９９逡逑５－ＨＩＡＡ邐０．０７５？２．４０邐Ｙ＝１６７４７４４．４８Ｘ－１１５８８７．８１邐０．９９９３逡逑ＨＶＡ邐０．２０邋？６．４０邐Ｙ＝５７４４３４Ｘ－１８０５６邐０．９９９８逡逑５－ＨＴ邐０．１２５邋？４．００邐Ｙ＝１５４９８５８．１７Ｘ－１５６９６０．３１邐０．９９９９逡逑４００００００１邐Ｙ＝７５８５３８Ｘ－４６７２６逡逑Ｒ２＝０．９９９９邐ｙ逡逑３００００００－逡逑＜２００００００－逡逑１００００００－邋＾逡逑，逡逑０邐２邐４邐６逡逑ｍ／ｎｇ逡逑Ａ逡逑４４逡逑

外加氨基酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（Ｘ），以外加氨基酸峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱逡逑坐標(biāo)（Ｙ），進(jìn)行回歸分析，ＧＡＢＡ、Ｇｌｕ的線性關(guān)系良好。結(jié)果見表１５，標(biāo)準(zhǔn)曲線見逡逑圖６。逡逑表１５線性關(guān)系考察結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋１５邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ逡逑成分邐線性范圍線性方程邐Ｒ２值逡逑ＧＡＢＡ邐２邋？８０００邐Ｙ＝０．０００１Ｘ＋０．０５１０邐０．９９５２逡逑Ｇｌｕ邐５邋？１６０００邐Ｙ＝０．０００１Ｘ＋０．０３８２邐０．９９８２逡逑５６逡逑

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本文編號(hào)：2820077